【摘 要】
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目的 探讨锰超氧化物歧化酶(SOD2)及其C47T变异在耳蜗毛细胞氧化损伤中的作用.方法 用Ala16型(突变克隆)和Val16型(野生克隆)SOD2转染HEI-OC1细胞,同时设立未转染和空质粒转
【机 构】
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中山大学公共卫生学院,广州,510800;510800,广州,中山大学公共卫生学院;广州市职业病防治院;广州市卫生监督所;广东省职业病防治院;广州市职业病防治院;
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目的 探讨锰超氧化物歧化酶(SOD2)及其C47T变异在耳蜗毛细胞氧化损伤中的作用.方法 用Ala16型(突变克隆)和Val16型(野生克隆)SOD2转染HEI-OC1细胞,同时设立未转染和空质粒转染对照.噻唑兰(MTr)法检测细胞的增殖情况;黄嘌呤氧化法检测胞内SOD2活力.100 μmol/L叔丁基过氧化氢(t-BHP)对其染毒12 h后,2-7-二氯荧光黄双乙酯(DCFH-DA)法检测胞内活性氧(ROS)水平;Annexin V/PI双标记后通过流式细胞仪检测细胞早期凋亡率和坏死率或晚期凋亡率.结果 SOD2表达质粒和空质粒转染不影响HEI-OC1细胞的增殖;Ala16SOD2和Val16 SOD2转染组SOD2活力分别是转染对照组的3.51和3.71倍,差异有统计学意义(P＜0.01),2种不同基因型间SOD2活力的差异无统计学意义(P＞0.05).染毒后,DCFH-DA方法 显示,未转染和空质粒对照组绝大部分细胞均发出++级明亮荧光,Ala16型和Val16型SOD2转染组中均只有约50%细胞发出±～+级别的模糊荧光.HEIOC1细胞早期凋亡率和坏死率或晚期凋亡率均下降,差异有统计学意义(P＜0.01),但是,其在SOD2 2种基因型之间的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 SOD2 3.71倍以下高水平的表达可以降低氧化应激耳蜗毛细胞胞内ROS水平,而SOD2 C47T变异则对之无影响.SOD2为NIHL易感基因,rs4880多态性位点则与NIHL遗传易感性无直接功能性的相关.
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