单克隆抗体亲和层析纯化日本脑炎病毒V3(E)糖蛋白的研究

来源 :中华实验和临床病毒学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:miracle_l
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本文探讨了用JEV-V3(E)McAb制备亲和层析柱纯化mg量V3糖蛋白的方法。结果表明,超声粉碎法裂解病毒囊膜不影响HA活性,而化学裂解剂(NP 40、去氧胆酸钠、Triton-X-100)处理病毒原始材料,则导致HA活性的丧失;pH11.5、0.05M二乙胺洗脱剂对V3的生物学活性影响较小,而3M KSCN对V3的HA活性有明显影响;用亲和力适中的McAb 2F2和mC3亲和层析柱纯化V3糖蛋白,其HA活性的回收率分别为30~40%及30~60%,蛋白收获量分别为0.33~1.26mg及0.21~0.66mg,相对HA比活性分别提高3~8倍及8~12倍;经SDS-PAGE考马斯亮蓝染色,显示一条主带,分子量相当于V3糖蛋白;纯化的V3糖蛋白可诱导小鼠产生HI抗体及NT抗体。

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