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目的建立单引物二次PCR法对重组质粒中HBV前C-C基因进行4处点突变，并与传统环状突变法进行对比。方法将变异点合成在一对互补引物中，先加入单条引物行PCR扩增，再以产物为模板，加入另一单条引物行PCR扩增。PCR产物加入DpnⅠ酶，切除其中变异前的模板质粒，转化入大肠埃希菌DH5α，卡那霉素培养基筛选阳性菌落增菌测序。结果对该质粒而言，采用单引物二次PCR法预期位点均发生变异，成功率高于传统环状突变法。4个变异后质粒与模板条带位置基本一致，4个质粒的拟变异位点均如预期变异成功，而其他氨基酸无变异。结论单