论文部分内容阅读
【摘 要】 目的：建立夏枯草八味丸的薄层色谱鉴别方法，为制定其质量控制标准提供试验依据。方法：采用薄层色谱法对夏枯草八味丸处方中的夏枯草球和板蓝根进行定性鉴别。夏枯草球鉴别中以环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲酸（15∶3∶3.5∶0.5，V/V）为展开剂；板蓝根的鉴别中以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（1∶1）为展开剂。结果：在薄层色谱中均能检出夏枯草球、板蓝根的特征斑点。结论：该方法简便可靠、专属性强、灵敏度高、重复性好，可作为夏枯草八味丸的定性鉴别和质量控制的方法。
【关键词】 夏枯草八味丸；薄层色谱；质量控制
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2018）12-0011-03
Abstract：Objective To establish a Thin-Layer Chromatography（TLC）identification method of eight flavor Xiakucao-pill suppositories，and to provide experimental basis for its quality control standard. Method The TLC method is mainly applied on major ingredients of this formula including Selfheal ball， and Radix isatidis. The developing solvent for Possession of Selfheal ball is Cyclohexane - Ethyl acetate - Isopropanol sopropanol tat（15∶3∶3.5∶0.5，V/V）， for Radix isatidis is Petroleum Ether （60～90 ℃） - Ethyl Acetate（1∶1）.Results The characterised spots of Xiakucao ball， and radix isatidis were identified through TLC methodology.Conclusion TLC is a simple，reliable and specific method with good reproducilility， and recommended to be used as quality control index for eight flavor Xiakucao-pill suppositories.
Keywords：Eight Flavor Xiakucao-pill； TLC； Quality Control
蒙藥夏枯草八味丸是全国名老蒙医专家乌氏对蒙医学历代文献记载诊治甲状腺病的相关理论和方药进行系统研究和临床实践中研制出的主治甲状腺结节的经验方，其临床疗效显著，毒副作用小，作为院内制剂使用[1]。夏枯草八味丸由夏枯草球、沙棘、红景天、板蓝根、金腰草等8种药材组成，具有散结、消肿、调节免疫力等功效，主治甲状腺结节、甲状腺肿大、乳腺增生、自身免疫性疾病等。方中的夏枯草球是主要药材之一，具有清肝泻火，明目，散结消肿之功效[2-4]，板蓝根具有清热解毒，凉血利咽等功效[5-7]，临床上常用于治疗发热头痛、肝炎、水痘、流行性感冒、咽炎等。为了控制夏枯草八味丸的质量，建立制剂中的夏枯草球和板蓝根的薄层色谱的鉴别方法，作为该制剂的质量控制参考。
1 仪器与材料
1.1 仪器 754N紫外可见分光光度计；KQ-500DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；电热鼓风干燥器（上海一恒科学仪器有限公司）；ZF-7型暗箱三用紫外线分析仪（上海嘉鹏科技有限公司）；电子天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）；硅胶G板和GF254板（青岛海洋化工厂分厂）；水浴恒温震荡器（上海跃进医疗器械有限公司）；投入式恒温水槽NTT-2200（上海爱朗仪器有限公司）。
1.2 材料 夏枯草八味丸样品（批号：438SW150 828、438SW150604、438SW150456）、夏枯草、板蓝根等药材均由阿拉善盟特戈熙甲状腺病蒙医专科医院提供。迷迭香酸（批号：PO5M6R3）、表告依春（批号：H29J6X1）、夏枯草球（批号：120993-201002）及板蓝根对照药材（批号：Z15O6B4550）均购于上海源叶生物科技有限公司；甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯，水为超纯水。阴性供试品由内蒙古自治区国际蒙医医院药物实验室自制。
2 方法与结果
2.1 夏枯草球的TLC鉴别 夏枯草球为处方中主要药味之一，具有清肝火、散郁结等作用。参照2015版《中国药典》一部“夏枯草”和“养血清脑丸”项下的薄层鉴别方法，以迷迭香酸对照品为对照进行条件摸索[8]。按处方比例折算，取夏枯草8味丸粉末6 g，研细，加稀盐酸8 mL、乙醚20 mL，加热回流30 min，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。取以相同工艺制备的阴性对照（缺夏枯草球）6 g，加稀盐酸8 mL、乙醚20 mL，加热回流30 min，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为阴性对照溶液。取单药0.6 g，加稀盐酸1 mL、乙醚20 mL，加热回流30 min，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为单药溶液。另取迷迭香酸对照品，加乙醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述阴性对照溶液5 μL，对照药材10 μL，单药、供试品溶液20 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上。以环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲酸（15∶3∶3.5∶0.5，V/V）为展开剂，展开，取出，晾干。置于紫外灯下（365 nm）检视。 结果薄层分离效果好，被检成分半点清晰，供试品色谱中在与迷迭香酸对照品、单药色谱相应的色谱相应的位置（Rf值0.62）上显相同颜色的荧光斑点，且同工艺同法制备的阴性对照（缺夏枯草球）色谱中在相应的位置上未出现斑点，表明处方中其他组分对夏枯草球鉴别无干扰，具有专属性。如图1所示。
2.2 板蓝根的TLC鉴别 板蓝根也属于处方中主要药味之一，参照2015版《中国药典》一部板蓝根项下的薄层鉴别方法，以表告依春对照品为对照进行条件摸索，按处方比例折算，取供试品4 g，以相同工艺制备的阴性对照（缺板蓝根）4 g，单药0.6 g，加80%甲醇20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液[8]。再对表告依春对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品的溶液。按照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述阴性对照溶液、对照品溶液、单药溶液各10 μL，供试品溶液20 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视。
结果薄层分离效果好，被检成分斑点清晰，供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置（Rf值0.423）上显相同颜色的斑点，且同工艺同法制备的阴性对照（缺板蓝根）色谱中在相应的位置上未出现斑点，表明处方中其他组分对板蓝根鉴别无干扰。3批供试品薄层色谱结果如图2所示。
3 讨论
该蒙药复方中夏枯草球和板蓝根的薄层色谱方法鉴别中，除了考察室温25 ℃、相对湿度35%条件以外，还按确定的方法分别对其考察了在低温（6 ℃）、低湿（相对湿度20%）条件下对薄层结果的影响，结果以上2种药材在低温、低湿条件下对整体分离效果无太大影响（Rf值夏枯草=0.59、Rf值板蓝根=0.433）。同时，在该制剂的薄层色谱鉴别研究中均采用了阴性对照试验，结果表明，各检出成分不受处方中其它群药的干扰，图谱完整。
综上，蒙药夏枯草八味丸中的夏枯草球和板蓝根的薄层色谱具有鉴别特征。所采用的方法专属性强、灵敏度高、重复性好，可作为夏枯草八味丸的质量控制指标。
参考文献
[1]乌苏日乐特.蒙医甲状腺病学[M].内蒙古：内蒙古科学技术出版社，2013.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社， 2010：263.
[3]窦景云，于俊生.夏枯草药理作用及临床应用研究进展[J].现代医药卫生，2013，29（7）：1039-1041.
[4]陆鹰，吴允孚，马前军.夏枯草多糖的体内免疫活性研究[J].广东药学院学报，2011，27（5）：502-505.
[5]林丽君，聂黎行，戴忠，等.板蓝根的研究概况[J].中国药业，2015，24（21）：1-4.
[6]孙巍.板蓝根的化学成分和药理作用综述[J].中国医药指南，2014，12（9）：35-36.
[7]施霞，倪华，刘云海.板蓝根化学成分及其药理活性研究进展[J].中国医院药学杂志，2006（11）：1397-1399.
[8]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M]. 北京：中国医药科技出版社，2015.
（收稿日期：2018-04-04 編辑：程鹏飞）
【关键词】 夏枯草八味丸；薄层色谱；质量控制
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2018）12-0011-03
Abstract：Objective To establish a Thin-Layer Chromatography（TLC）identification method of eight flavor Xiakucao-pill suppositories，and to provide experimental basis for its quality control standard. Method The TLC method is mainly applied on major ingredients of this formula including Selfheal ball， and Radix isatidis. The developing solvent for Possession of Selfheal ball is Cyclohexane - Ethyl acetate - Isopropanol sopropanol tat（15∶3∶3.5∶0.5，V/V）， for Radix isatidis is Petroleum Ether （60～90 ℃） - Ethyl Acetate（1∶1）.Results The characterised spots of Xiakucao ball， and radix isatidis were identified through TLC methodology.Conclusion TLC is a simple，reliable and specific method with good reproducilility， and recommended to be used as quality control index for eight flavor Xiakucao-pill suppositories.
Keywords：Eight Flavor Xiakucao-pill； TLC； Quality Control
蒙藥夏枯草八味丸是全国名老蒙医专家乌氏对蒙医学历代文献记载诊治甲状腺病的相关理论和方药进行系统研究和临床实践中研制出的主治甲状腺结节的经验方，其临床疗效显著，毒副作用小，作为院内制剂使用[1]。夏枯草八味丸由夏枯草球、沙棘、红景天、板蓝根、金腰草等8种药材组成，具有散结、消肿、调节免疫力等功效，主治甲状腺结节、甲状腺肿大、乳腺增生、自身免疫性疾病等。方中的夏枯草球是主要药材之一，具有清肝泻火，明目，散结消肿之功效[2-4]，板蓝根具有清热解毒，凉血利咽等功效[5-7]，临床上常用于治疗发热头痛、肝炎、水痘、流行性感冒、咽炎等。为了控制夏枯草八味丸的质量，建立制剂中的夏枯草球和板蓝根的薄层色谱的鉴别方法，作为该制剂的质量控制参考。
1 仪器与材料
1.1 仪器 754N紫外可见分光光度计；KQ-500DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；电热鼓风干燥器（上海一恒科学仪器有限公司）；ZF-7型暗箱三用紫外线分析仪（上海嘉鹏科技有限公司）；电子天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）；硅胶G板和GF254板（青岛海洋化工厂分厂）；水浴恒温震荡器（上海跃进医疗器械有限公司）；投入式恒温水槽NTT-2200（上海爱朗仪器有限公司）。
1.2 材料 夏枯草八味丸样品（批号：438SW150 828、438SW150604、438SW150456）、夏枯草、板蓝根等药材均由阿拉善盟特戈熙甲状腺病蒙医专科医院提供。迷迭香酸（批号：PO5M6R3）、表告依春（批号：H29J6X1）、夏枯草球（批号：120993-201002）及板蓝根对照药材（批号：Z15O6B4550）均购于上海源叶生物科技有限公司；甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯，水为超纯水。阴性供试品由内蒙古自治区国际蒙医医院药物实验室自制。
2 方法与结果
2.1 夏枯草球的TLC鉴别 夏枯草球为处方中主要药味之一，具有清肝火、散郁结等作用。参照2015版《中国药典》一部“夏枯草”和“养血清脑丸”项下的薄层鉴别方法，以迷迭香酸对照品为对照进行条件摸索[8]。按处方比例折算，取夏枯草8味丸粉末6 g，研细，加稀盐酸8 mL、乙醚20 mL，加热回流30 min，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。取以相同工艺制备的阴性对照（缺夏枯草球）6 g，加稀盐酸8 mL、乙醚20 mL，加热回流30 min，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为阴性对照溶液。取单药0.6 g，加稀盐酸1 mL、乙醚20 mL，加热回流30 min，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为单药溶液。另取迷迭香酸对照品，加乙醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述阴性对照溶液5 μL，对照药材10 μL，单药、供试品溶液20 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上。以环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲酸（15∶3∶3.5∶0.5，V/V）为展开剂，展开，取出，晾干。置于紫外灯下（365 nm）检视。 结果薄层分离效果好，被检成分半点清晰，供试品色谱中在与迷迭香酸对照品、单药色谱相应的色谱相应的位置（Rf值0.62）上显相同颜色的荧光斑点，且同工艺同法制备的阴性对照（缺夏枯草球）色谱中在相应的位置上未出现斑点，表明处方中其他组分对夏枯草球鉴别无干扰，具有专属性。如图1所示。
2.2 板蓝根的TLC鉴别 板蓝根也属于处方中主要药味之一，参照2015版《中国药典》一部板蓝根项下的薄层鉴别方法，以表告依春对照品为对照进行条件摸索，按处方比例折算，取供试品4 g，以相同工艺制备的阴性对照（缺板蓝根）4 g，单药0.6 g，加80%甲醇20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液[8]。再对表告依春对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品的溶液。按照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述阴性对照溶液、对照品溶液、单药溶液各10 μL，供试品溶液20 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视。
结果薄层分离效果好，被检成分斑点清晰，供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置（Rf值0.423）上显相同颜色的斑点，且同工艺同法制备的阴性对照（缺板蓝根）色谱中在相应的位置上未出现斑点，表明处方中其他组分对板蓝根鉴别无干扰。3批供试品薄层色谱结果如图2所示。
3 讨论
该蒙药复方中夏枯草球和板蓝根的薄层色谱方法鉴别中，除了考察室温25 ℃、相对湿度35%条件以外，还按确定的方法分别对其考察了在低温（6 ℃）、低湿（相对湿度20%）条件下对薄层结果的影响，结果以上2种药材在低温、低湿条件下对整体分离效果无太大影响（Rf值夏枯草=0.59、Rf值板蓝根=0.433）。同时，在该制剂的薄层色谱鉴别研究中均采用了阴性对照试验，结果表明，各检出成分不受处方中其它群药的干扰，图谱完整。
综上，蒙药夏枯草八味丸中的夏枯草球和板蓝根的薄层色谱具有鉴别特征。所采用的方法专属性强、灵敏度高、重复性好，可作为夏枯草八味丸的质量控制指标。
参考文献
[1]乌苏日乐特.蒙医甲状腺病学[M].内蒙古：内蒙古科学技术出版社，2013.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社， 2010：263.
[3]窦景云，于俊生.夏枯草药理作用及临床应用研究进展[J].现代医药卫生，2013，29（7）：1039-1041.
[4]陆鹰，吴允孚，马前军.夏枯草多糖的体内免疫活性研究[J].广东药学院学报，2011，27（5）：502-505.
[5]林丽君，聂黎行，戴忠，等.板蓝根的研究概况[J].中国药业，2015，24（21）：1-4.
[6]孙巍.板蓝根的化学成分和药理作用综述[J].中国医药指南，2014，12（9）：35-36.
[7]施霞，倪华，刘云海.板蓝根化学成分及其药理活性研究进展[J].中国医院药学杂志，2006（11）：1397-1399.
[8]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M]. 北京：中国医药科技出版社，2015.
（收稿日期：2018-04-04 編辑：程鹏飞）