糖皮质激素对骨髓微血管内皮细胞一氧化氮合酶磷酸化的影响

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目的 观察经糖皮质激素处理后的骨髓微血管内皮细胞一氧化氮(NO)的合成变化,探讨激素性股骨头缺血性坏死的发病机制.方法 取行人工全髋关节置换术患者自愿捐献的股骨头内松质骨,酶消化法分离培养骨髓微血管内皮细胞,取第3代细胞.利用氢化可的松诱导建立激素性股骨头缺血性坏死模型.分别与不同浓度(0、0.10、0.50、1.00、2.00g/L)氢化可的松培养,孵育8h;不同时间(0、4、8、16h),终质量浓度为1 g/L氢化可的松培养,随后对骨髓微血管内皮细胞中NO浓度进行检测,Western blot检测蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和磷酸化eNOS (p-eNOS)蛋白表达.Pull-down检测eNOS与Akt蛋白质之间的相互作用力.结果 氢化可的松对骨髓微血管内皮细胞NO的合成有抑制作用,表现出浓度依赖性和时间依赖性(P<0.05).eNOS Thr 495位点的磷酸化状态未发生改变,而Ser633位点发生了去磷酸化.同时检测到Akt Thr308/Ser473位点发生了去磷酸化,eNOS与Akt蛋白质之间的相互作用力减弱.结论 糖皮质激素抑制骨髓微血管内皮细胞NO合成,其机制可能与抑制磷酸肌醇3激酶(PI3K)-Akt-eNOS信号转导通路有关.
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