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目的
探讨体外高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞(RMCs)中抗衰老蛋白Klotho及中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)两者表达水平的变化及其相关作用，同时观察Toll样受体-4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)p65通路在此过程中的作用。
方法设计并合成针对NGAL基因的3个特异性siRNA序列转入RMCs，筛选抑制效率最佳的siRNA用于后续实验；以吡咯烷二硫基甲酸盐(PDTC)或Klotho重组蛋白干预体外高糖培养的RMCs；采用实时定量PCR检测Klotho、TLR4、NGAL mRNA的表达，Western印迹检测Klotho、TLR4、NF-κB p65、NGAL、纤连蛋白、结缔组织生长因子(CTGF)的表达，ELISA检测单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、趋化因子配体5(CXCL5)的分泌。
结果高糖抑制Klotho表达(P<0.05)并激活TLR4/NF-κB p65通路促进NGAL、纤连蛋白、CTGF、MCP-1、CXCL5表达，基因沉默NGAL表达后纤连蛋白、CTGF、MCP-1、CXCL5表达明显下降(P<0.01)，PDTC干预后NGAL蛋白表达明显下降(P<0.01)，Klotho重组蛋白干预可抑制TLR4/NF-κB p65通路活性，下调NGAL、纤连蛋白、CTGF、MCP-1、CXCL5的表达(P<0.01)。
结论在RMCs中，Klotho可通过抑制高糖刺激的TLR4/NF-κB p65通路活性下调NGAL的表达，从而抑制纤连蛋白、CTGF、MCP-1、CXCL5的表达，可能对糖尿病肾脏组织起保护作用。(Chin J Endocrinol Metab, 2015, 31: 611-617)