【摘 要】
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目的:建立新生SD大鼠三叉神经元细胞体外原代培养模型,为三叉神经的细胞学研究提供实验基础。方法:选取新生24h以内SD大鼠24只,剥离脑组织,手术显微镜下分离大鼠三叉神经节,
【基金项目】
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国家自然科学基金(编号:81550037);安徽省教育厅高校自然科学研究项目(编号:KJ2017A255);皖南医学院博士科研启动基金(编号:WK2014RC03);皖南医学院大学生科研基金(编号:WK2016S10)
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目的:建立新生SD大鼠三叉神经元细胞体外原代培养模型,为三叉神经的细胞学研究提供实验基础。方法:选取新生24h以内SD大鼠24只,剥离脑组织,手术显微镜下分离大鼠三叉神经节,无菌剪碎后采用胰蛋白酶与DNA酶混合分次消化和机械吹打相结合的方法制备神经细胞悬液,接种于6孔板,倒置相差显微镜下观察细胞状态;免疫荧光染色鉴定神经元特异性抗原NeuN、β-tubulinⅢ的表达。结果:分离出来的三叉神经细胞4h后贴壁生长,并长出突起,随时间增加,突起变长并交错呈网络,培养至3~7d神经细胞状态最佳,随后逐渐凋亡,体外培养的神经细胞可生长15d,无增殖传代的能力;神经元特异性抗原NeuN、β-tubulinⅢ的表达阳性。结论:胰蛋白酶与DNA酶混合分次消化法可分离出大量三叉神经元细胞,为后续的细胞学研究提供实验基础。
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