【摘 要】
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将人工合成的含鼠疫耶尔森氏菌的2个抗原位点、汉坦病毒的5个抗原位点和钩端螺旋体的5个抗原位点的串联基因片段克隆到原核表达载体pET-20b中,构建重组表达质粒pET-rYHL.转化
【机 构】
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吉林大学公共卫生学院,吉林省出入境检验检疫局,吉林大学第一医院心血管中心
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将人工合成的含鼠疫耶尔森氏菌的2个抗原位点、汉坦病毒的5个抗原位点和钩端螺旋体的5个抗原位点的串联基因片段克隆到原核表达载体pET-20b中,构建重组表达质粒pET-rYHL.转化E.coli BL21(DE3)后获得表达菌株.表达菌株经IPTG诱导后,可高效表达带组氨酸标签的以包涵体形式存在的融合蛋白.包涵体蛋白经尿素变性溶解、His Trap HP Kit柱纯化、SDS-PAGE及Western B1ot分析研究,结果表明,在分子量40000处有一特异性蛋白条带,获得纯度达98%以上的蛋白.进一步ELLSA试验表明,该蛋白与鼠疫、流行性出血热及钩端螺旋体病阳性血清均能较好地结合,而与其它鼠传疾病血清无交叉反应.
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