【摘 要】
：
目的 构建变形链球菌(变链菌)表面蛋白可变区(extended-v)真核表达质粒pEGFP-NI-SrV+,并转染哺乳动物细胞293T,为进一步研究该区功能奠定基础.方法 根据已报道变链菌OMZ175的
【机 构】
：
温州医学院附属口腔医院口腔内科,遵义医学院口腔系,山东大学口腔医学院牙体牙髓科
论文部分内容阅读
目的 构建变形链球菌(变链菌)表面蛋白可变区(extended-v)真核表达质粒pEGFP-NI-SrV+,并转染哺乳动物细胞293T,为进一步研究该区功能奠定基础.方法 根据已报道变链菌OMZ175的sry+基因序列,化学合成srV+的编码基因srv+,将真核载体质粒pEGFP-N1和srv+基因片段分别用Kpn Ⅰ/Xho Ⅰ双酶切,连接获取重组质粒pEGFP-NI-SrV+,并对其进行PCR、酶切和测序鉴定.通过脂质体法瞬时转染哺乳动物细胞293T.运用荧光显微镜观察、Western blot及real-time PCR法检目的 蛋白在293T细胞中的表达情况.结果 通过基凶化学合成技术,获得1136 bp的目的 基因srv+,经测序鉴定与模板目的 基因序列一致;成功构建真核表达质粒pEGFP-N1-SrV+;PCR扩增榆测可获得1.33 kb目的 基因片段;Kpn Ⅰ/Xho Ⅰ双酶切可见4.7 kb和1.1 kb两条电泳条带,证实重组质粒pEGFP-N1-SrV+携带目的 基因;通过荧光显微镜观察到重组质粒pEGFP-N1-SrV+融合GFP后的表达,目的 细胞的转染效率达到80%以上;Western blot检测到相对分子质量(M1)为72 × 103处有特征条带,其大小和Srv+融合蛋白(42 × 103+28 × 103=70 × 103)相吻合;real-time PCR 数值分析显示:在293T细胞中,srv+基因的过表达效果显著.结论 成功构建了真核表达载体质粒pEGFP-N1-SrV+,并能够在哺乳动物细胞293T中表达.
其他文献
利用正则表达式工具及OFFICE软件实现关键词索引自动排序。首先用UltraEdit软件对索引进行正则表达式处理,处理后使用WORD软件对索引进行表格转换,转换后数据导入到EXCEL程序
生产力包括劳动者,劳动资料和劳动对象和环境等诸多要素,本文主要从劳动者的素质和环境两方面来分析蓄水前后三峡地区两要素的变化,并提出相应的对策与建议.
目的:优化甘草黄酮的β-环糊精包合工艺。方法:采用正交试验对甘草黄酮-β-环糊精包合的主要参数进行考察,以综合评分为指标,筛选最佳工艺,并采用紫外分光光度法和薄层色谱法
目的:比较3首治疗黄疸的经典方剂对奈异硫氰酸脂(ANIT)诱发实验性肝内胆汁淤积大鼠肝组织病理学变化的影响。方法:一次性给予100 mg.kg-1ANIT复制大鼠肝内胆汁淤积模型;于造
1.患者资料:男性,53岁,体质量83kg.6年前,出现肝区不适、食欲不振、肝功能异常,HCV RNA为5×106IU/ml,确诊为慢性丙型肝炎.曾接受干扰素(IFN)α-2b联合利巴韦林(RBV)1000 mg/
Among the difficulties that influence future dam operations,reservoir sedimentation is the most problematic for engineers.This study predicted the amount and pa
目的 探讨中枢神经细胞瘤(CNC)的MRI表现特征.方法 南方医科大学珠江医院自2007年1月至2010年1月行手术治疗CNC患者13例,术前均行MRI平扫及增强扫描,其中1例并行术前CT平扫及
Acid sulphate soil (ASS) is a kind of soil which is harmful to the environment. ASS is hard to efficiently assess efficiently in the subsurface, although it is