运用磁珠分选法建立免疫细胞共培养体系

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目的以相互作用的几种免疫细胞上共同表达的抗原物质为标志,运用磁珠分选技术,从慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞中同时获得并建立体外多细胞共培养体系,体外观察细胞之间的相互作用。方法采用梯度离心法分离30例慢性乙肝病毒感染者外周血单个核细胞(PBMC),采用免疫磁珠分选法分离获得CXCR5+细胞,通过流式细胞仪检测CXCR5+细胞纯度和组成,并将CXCR5+细胞进行体外培养。在分离得到的CXCR5+细胞的基础上,将CXCR5+细胞分为3组,分别为对照组:不加任何刺激;实验组一:加入IL-21刺激培养,实验组二:与人肝癌细胞系(HepG2)2215细胞混合培养。体外培养一周后,流式细胞仪检测实验组与对照组细胞B细胞数量变化,ELISA测定培养体系中上清液HBe抗体的含量。结果 1)用流式细胞仪鉴定CXCR5+细胞的纯度和构成:CXCR5+细胞纯度为85.5±5.8%,其中Tfh细胞占23.8±7.4%,B细胞占35.6±7.6%;2)培养7天后,IL-21刺激组B细胞百分率为47.2±1.8%,与(HepG2)2215混合培养组B细胞百分率为40.2±3.5%,空白对照组B细胞百分率为36.6±7.5%,IL-21刺激组与对照组,(HepG2)2215混合培养组与对照组B细胞百分率均有显著差异(p<0.05);3)ELISA检测培养液上清HBeAb定量,IL-21刺激组为0.668±0.094 pg/ml,空白对照组为0.378±0.088 pg/ml,两组有显著差异(p<0.05)。结论使用间接免疫磁珠分离法可成功建立CXCR5+B淋巴细胞和Tfh细胞的共培养体系,为进一步体外研究细胞之间相互关系奠定基础。
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