【摘 要】
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已知感染猪群的冠状病毒有猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）、猪急性腹泻综合征冠状病毒（SADS-CoV）、猪呼吸道冠状病毒（PRCV）、猪血凝性脑脊髓炎病毒（PHEV）;本研究拟建立针对这6种病毒的通用荧光定量PCR检测方法。依据NCBI公布的这6种猪冠状病毒序列，利用MEGA软件进行全基因序列比对，通过分析在ORF1b中找到1段长为196
【基金项目】
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河南省杰出青年基金资助项目（202300410192）；
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已知感染猪群的冠状病毒有猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）、猪急性腹泻综合征冠状病毒（SADS-CoV）、猪呼吸道冠状病毒（PRCV）、猪血凝性脑脊髓炎病毒（PHEV）;本研究拟建立针对这6种病毒的通用荧光定量PCR检测方法。依据NCBI公布的这6种猪冠状病毒序列，利用MEGA软件进行全基因序列比对，通过分析在ORF1b中找到1段长为196 bp的保守序列，设计兼并引物，建立了用于检测猪冠状病毒的通用荧光定量PCR检测方法；结果显示，该检测方法能扩增出6种猪冠状病毒，对PDCoV、PRCV、PHEV、SADS-CoV、TGEV的灵敏性均可达到10~1拷贝/μL,对PEDV的灵敏性可达到10~0拷贝/μL;与CSFV、PRRSV、PPV、PCV、PRV无交叉反应，特异性良好；组内和组间变异系数均小于2.2%,重复性良好。利用建立的检测方法对62份病料进行检测，检测出27份样品呈现猪冠状病毒阳性，而利用普通RT-PCR方法共检测出24份阳性样品。选择2份猪冠状病毒阳性样品进行克隆测序，在NCBI上进行比对，通过同源性分析，分别鉴定为PDCoV和PEDV感染。本试验建立的猪冠状病毒通用荧光定量PCR检测方法特异性、重复性好，敏感性高，能用于对猪冠状病毒的检测和流行病学调查，同时还可监测猪新型冠状病毒的出现。
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