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【摘要】目的研究抑癌基因p53及Bcl-2、Bax在葡萄胎组织中的表达及其意义。方法应用Western Blot检测26例恶性葡萄胎组、26 例无恶性葡萄胎组、22 例正常早孕绒毛组标本中p53、Bcl-2、Bax的表达。应用统计软件SPSS13.0对检测进行统计学分析，p＜0.05为差异有显著性。在正常对照组、无恶性葡萄胎组、恶性葡萄胎组中p53蛋白的阳性逐渐增加,恶性葡萄胎组与正常早孕绒毛组织中相比有显著差异(P<0.01)，恶性葡萄胎组、无恶性葡萄胎组相比有显著差异(P<0.05)。正常对照组、无恶性葡萄胎组、恶性葡萄胎组中Bcl-2蛋白的阳性表达量逐渐增加,恶性葡萄胎组与正常早孕绒毛组织中相比有显著差异(P<0.05)，恶性葡萄胎组、无恶性葡萄胎组两组相比无显著性差异(P>0.05)。在正常对照组中、无恶性葡萄胎组、恶性葡萄胎组中Bax表达量逐渐增加。恶性葡萄胎组、无恶性葡萄胎组与对照组相比具有显著性差异(P<0.05)，恶性葡萄胎组与无恶性葡萄胎组相比无显著性差异(P>0.05)。
【关键词】葡萄胎；p53；Bcl-2；Bax ；增殖
葡萄胎是由妊娠后胎盘绒毛滋养细胞增生、间质水肿而形成的水泡状物。属于妊娠良性疾病, 但具有生长活跃及潜在恶性的特点。其中10% ~ 20%可以发生恶变, 成为侵蚀性葡萄胎或绒癌。目前妊娠滋养细胞疾病的治疗效果较为满意, 但其发病机制及恶变相关因素都不十分明确。早期诊断葡萄胎的恶变对治疗及预后有重要意义。
1材料和方法
1.1研究对象收集2008 年1 月至2011 年3月因葡萄胎住院的首次清宫标本52例, 年龄21~ 42 岁。其中恶性葡萄胎26 例,无恶性葡萄胎26例。收集同期在本院人流术早孕绒毛组织标本( 正常对照组) 22 例, 年龄20~ 41岁。
1.2实验方法RIPA裂解液200μL充分裂解组织，4℃离心（12000rpm）5min提取蛋白，考马斯亮蓝G250法分光光度计测样品蛋白浓度，以12% SDS-PAGE电泳分离。电转移蛋白至PVDF膜，5%脱脂奶粉封闭1h，一抗(1∶500)4℃封闭过夜，二抗(辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体(1：1000) 孵育1h，化学发光法显示结果。
1.3实验结果判定目的条带与β-Actin条带灰度值比值即为此目的蛋白的相对表达量，将正常子宫内膜与β-Actin的比值设为1.00。取3次结果的平均值。
1.4统计学分析数据采用均数±标准差（ｘ±s）表示，应用SPSS 13.0软件处理。所用统计分析方法为χ2检验。p＜0.05、p＜0.01为差异有统计学意义。
2实验结果
Western Blot法检测p53、Bcl-2、Bax蛋白的表达。实验结果显示在正常对照组、无恶性葡萄胎组、恶性葡萄胎组中p53蛋白的阳性表达量逐渐增加,其中恶性葡萄胎组与正常早孕绒毛组织中相比具有显著性差异(P<0.01)，恶性葡萄胎组、无恶性葡萄胎组两组相比具有显著性差(P<0.05)。在正常对照组、无恶性葡萄胎组、恶性葡萄胎组中Bcl-2蛋白的阳性表达量逐渐增加,其中恶性葡萄胎组与正常早孕绒毛组织中相比具有显著性差异(P<0.05)，恶性葡萄胎组、无恶性葡萄胎组两组相比无显著性差异(P>0.05)。在正常对照组中、无恶性葡萄胎组、恶性葡萄胎组中Bax表达量逐渐增加。恶性葡萄胎组、无恶性葡萄胎组与对照组相比具有显著性差异(P<0.05)，恶性葡萄胎组与无恶性葡萄胎组相比无显著性差异(P>0.05)。
表1.p53 、Bcl-2、Bax在正常早孕绒毛组织、葡萄胎中的表达量
*p<0.05与对照组比较 ，**p<0.01与对照组比较
3讨论
p53 蛋白具有调节细胞生长和抑制细胞转化的作用,并和细胞凋亡有密切关系。研究结果显示，22 例正常早孕绒毛组织、无恶性葡萄胎组、恶性葡萄胎组p53蛋白表达阳性率分别为100% 、126%和189% ，有明显增高的趋势， 其中恶性葡萄胎组p53蛋白表达显著高于无恶性葡萄胎组，提示p53 蛋白可能与葡萄胎发展及恶变有关。Bcl-2基因是近年发现的一种癌基因，不影响细胞增殖,而是作为细胞凋亡的抑制剂调节细胞凋亡，Bcl-2过度表达可减少细胞死亡，可引起增殖性病变或肿瘤发生。Bcl-2蛋白又被称为抑制凋亡蛋白。研究显示，恶性葡萄胎组和无恶性葡萄胎组中的Bcl-2蛋白表达阳性率均显著高于对照组，无恶性葡萄胎组Bcl-2蛋白表达阳性率略低于恶性葡萄胎组，提示Bcl-2蛋白表达可能与葡萄胎发展及恶变有关，在葡萄胎向恶性转化中起重要作用。Bcl-2基因活化并不直接造成细胞转化，是通过抵抗多种因素诱导的凋亡延长细胞生存期，为基因异常提供条件，在进展期中癌变组织逐渐失去Bcl-2 蛋白表达，提示葡萄胎癌变的发生发展是多种癌基因和抑癌基因在不同时期共同作用的结果。认为细胞凋亡主要由两条途径: (1) 线粒体通路,由两类调控蛋白质，一类为抑制凋亡蛋白Bcl-2等，一类为促凋亡蛋白Bax等，它们的比例决定了细胞在受到凋亡信号刺激时是否发生凋亡。(2) 细胞表面死亡受体通路,这些细胞表面的蛋白质能与携带凋亡信号的专一性配体结合，诱导细胞凋亡。实验研究了早孕绒毛组织、无恶性葡萄胎组、恶性葡萄胎组凋亡调控蛋白Bcl-2、Bax蛋白的改变。实验结果，恶性葡萄胎中的Bcl-2/Bax比值显著高于正常早孕绒毛组织，从而增加了葡萄胎组织对各种凋亡刺激因素的抵抗力，更易引起增殖性病变或肿瘤发生。
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【关键词】葡萄胎；p53；Bcl-2；Bax ；增殖
葡萄胎是由妊娠后胎盘绒毛滋养细胞增生、间质水肿而形成的水泡状物。属于妊娠良性疾病, 但具有生长活跃及潜在恶性的特点。其中10% ~ 20%可以发生恶变, 成为侵蚀性葡萄胎或绒癌。目前妊娠滋养细胞疾病的治疗效果较为满意, 但其发病机制及恶变相关因素都不十分明确。早期诊断葡萄胎的恶变对治疗及预后有重要意义。
1材料和方法
1.1研究对象收集2008 年1 月至2011 年3月因葡萄胎住院的首次清宫标本52例, 年龄21~ 42 岁。其中恶性葡萄胎26 例,无恶性葡萄胎26例。收集同期在本院人流术早孕绒毛组织标本( 正常对照组) 22 例, 年龄20~ 41岁。
1.2实验方法RIPA裂解液200μL充分裂解组织，4℃离心（12000rpm）5min提取蛋白，考马斯亮蓝G250法分光光度计测样品蛋白浓度，以12% SDS-PAGE电泳分离。电转移蛋白至PVDF膜，5%脱脂奶粉封闭1h，一抗(1∶500)4℃封闭过夜，二抗(辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体(1：1000) 孵育1h，化学发光法显示结果。
1.3实验结果判定目的条带与β-Actin条带灰度值比值即为此目的蛋白的相对表达量，将正常子宫内膜与β-Actin的比值设为1.00。取3次结果的平均值。
1.4统计学分析数据采用均数±标准差（ｘ±s）表示，应用SPSS 13.0软件处理。所用统计分析方法为χ2检验。p＜0.05、p＜0.01为差异有统计学意义。
2实验结果
Western Blot法检测p53、Bcl-2、Bax蛋白的表达。实验结果显示在正常对照组、无恶性葡萄胎组、恶性葡萄胎组中p53蛋白的阳性表达量逐渐增加,其中恶性葡萄胎组与正常早孕绒毛组织中相比具有显著性差异(P<0.01)，恶性葡萄胎组、无恶性葡萄胎组两组相比具有显著性差(P<0.05)。在正常对照组、无恶性葡萄胎组、恶性葡萄胎组中Bcl-2蛋白的阳性表达量逐渐增加,其中恶性葡萄胎组与正常早孕绒毛组织中相比具有显著性差异(P<0.05)，恶性葡萄胎组、无恶性葡萄胎组两组相比无显著性差异(P>0.05)。在正常对照组中、无恶性葡萄胎组、恶性葡萄胎组中Bax表达量逐渐增加。恶性葡萄胎组、无恶性葡萄胎组与对照组相比具有显著性差异(P<0.05)，恶性葡萄胎组与无恶性葡萄胎组相比无显著性差异(P>0.05)。
表1.p53 、Bcl-2、Bax在正常早孕绒毛组织、葡萄胎中的表达量
*p<0.05与对照组比较 ，**p<0.01与对照组比较
3讨论
p53 蛋白具有调节细胞生长和抑制细胞转化的作用,并和细胞凋亡有密切关系。研究结果显示，22 例正常早孕绒毛组织、无恶性葡萄胎组、恶性葡萄胎组p53蛋白表达阳性率分别为100% 、126%和189% ，有明显增高的趋势， 其中恶性葡萄胎组p53蛋白表达显著高于无恶性葡萄胎组，提示p53 蛋白可能与葡萄胎发展及恶变有关。Bcl-2基因是近年发现的一种癌基因，不影响细胞增殖,而是作为细胞凋亡的抑制剂调节细胞凋亡，Bcl-2过度表达可减少细胞死亡，可引起增殖性病变或肿瘤发生。Bcl-2蛋白又被称为抑制凋亡蛋白。研究显示，恶性葡萄胎组和无恶性葡萄胎组中的Bcl-2蛋白表达阳性率均显著高于对照组，无恶性葡萄胎组Bcl-2蛋白表达阳性率略低于恶性葡萄胎组，提示Bcl-2蛋白表达可能与葡萄胎发展及恶变有关，在葡萄胎向恶性转化中起重要作用。Bcl-2基因活化并不直接造成细胞转化，是通过抵抗多种因素诱导的凋亡延长细胞生存期，为基因异常提供条件，在进展期中癌变组织逐渐失去Bcl-2 蛋白表达，提示葡萄胎癌变的发生发展是多种癌基因和抑癌基因在不同时期共同作用的结果。认为细胞凋亡主要由两条途径: (1) 线粒体通路,由两类调控蛋白质，一类为抑制凋亡蛋白Bcl-2等，一类为促凋亡蛋白Bax等，它们的比例决定了细胞在受到凋亡信号刺激时是否发生凋亡。(2) 细胞表面死亡受体通路,这些细胞表面的蛋白质能与携带凋亡信号的专一性配体结合，诱导细胞凋亡。实验研究了早孕绒毛组织、无恶性葡萄胎组、恶性葡萄胎组凋亡调控蛋白Bcl-2、Bax蛋白的改变。实验结果，恶性葡萄胎中的Bcl-2/Bax比值显著高于正常早孕绒毛组织，从而增加了葡萄胎组织对各种凋亡刺激因素的抵抗力，更易引起增殖性病变或肿瘤发生。
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