【摘 要】
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为鉴定猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV) NSP8蛋白的抗原表位,本研究对GST-NSP8重组蛋白进行了原核表达,并用纯化后的重组蛋白免疫6周
【机 构】
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沈阳农业大学畜牧兽医学院,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,黑龙江八一农垦大学动物科技学院,东北农业大学生命科学学院,首都医科大学基础医学院
【基金项目】
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黑龙江省高等学校科技创新团队项目;
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为鉴定猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV) NSP8蛋白的抗原表位,本研究对GST-NSP8重组蛋白进行了原核表达,并用纯化后的重组蛋白免疫6周龄BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾脏,采用常规杂交瘤细胞融合方法,经3次亚克隆后制备了1株稳定分泌抗NSP8蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株.分泌的单克隆抗体亚类鉴定其重链为IgG1型,轻链为κ链;杂交瘤细胞培养上清的效价为1∶3 200.Westernblotting试验结果表明该单克隆抗体能识别原核及真核表达的NSP8重组蛋白.利用截短表达的方法对NSP8蛋白进行抗原表位的鉴定,初步确定了单克隆抗体针对的抗原表位序列为31SPQILKQLTKAFNIAKSDFEREASV55.本研究制备的单克隆抗体及对抗原表位的鉴定,为TGEV NSP8蛋白相关功能的研究奠定了基础.
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