目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV) DNA复制和表达的跨种属特异性. 方法分离培养原代大鼠肝细胞(PRH)与原代鸭肝细胞(PDH),电转HBV线性裸DNA (转染组每1×107 PRH或PDH 1.19×1012拷贝),分别于转染后1～15d各时点,收集PRH或PDH培养上清液与细胞裂解液,分别以Southern杂交分析和斑点杂交法分析HBV DNA的复制中间体与复制型式;以全自动免疫荧光检测系统检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg),以western免疫印迹、免疫斑点印迹和免疫细胞化学法检测乙型肝炎核心抗原(HBcAg);用逆转录聚合酶链反应检测HBV S/X mRNA.以单纯电击PRH/PDH为对照组. 结果 Southern杂交分析显示:PRH/PDH转染组HBV DNA均为游离复制型,可见4.0kb以下分子区带,包括松弛环状DNA、共价闭环形DNA和单链线形DNA等复制中间体;未见整合型HBV DNA,高分子(4.0～24.0kb) 区带.HBV DNA在PRH中表达蛋白产物水平,HBsAg于转染后各时点PRH裂解液中均可检测到(P/N值2.17～93.41,平均值为14.74±31.82,阳性≥2.1),峰值于1～3d;仅转染后1d PRH培养上清液中检测到HBsAg,P/N值为6.66;HBcAg和HBeAg仅于转染后1～3d时点内检测到低度表达;HBV S mRNA为阳性,而X mRNA为阴性.HBV DNA转染PDH组,转染后1、3、5d各时点PDH裂解液中HBsAg分别为15.24、14.55和5.13(P/N值,阳性≥2.1),HBeAg均为阴性;PDH培养上清液中HBsAg与HBeAg均阴性;上述各项指标于对照组均为阴性.斑点杂交法显示转染组各时点PRH/PDH裂解液中HBV DNA均为阳性,对照组为阴性. 结论 HBV DNA能在原代鸭肝细胞和原代大鼠肝细胞中复制和表达,为肝细胞内环境依赖性,无严格种属特异性限制。
乙型肝炎病毒在异种动物原代肝细胞中复制与表达的研究
【摘 要】
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目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV) DNA复制和表达的跨种属特异性. 方法分离培养原代大鼠肝细胞(PRH)与原代鸭肝细胞(PDH),电转HBV线性裸DNA (转染组每1×107 PRH或PDH 1.19×1012拷贝),分别于转染后1～15d各时点,收集PRH或PDH培养上清液与细胞裂解液,分别以Southern杂交分析和斑点杂交法分析HBV DNA的复制中间体与复制型式;以全自动免疫荧光检测系统检
【机 构】
：
400016,重庆医科大学附属第一医院感染科,重庆医科大学病毒性肝炎研究所,重庆医科大学病毒性肝炎研究所,重庆医科大学病毒性肝炎研究所,重庆医科大学病毒性肝炎研究所,重庆医科大学病毒性肝炎研究所,重庆
【出 处】
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中华肝脏病杂志
【发表日期】
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2004年12期
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