观察玻璃体腔移植人脐带间充质干细胞(hUCMSC)对糖尿病大鼠视网膜形态及胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)、视紫红质(RHO)表达的影响。
方法8周龄健康雄性Sprague-Dwaley大鼠78只用于实验。其中，70只大鼠按40 mg/kg剂量尾静脉注射链脲佐菌素建立糖尿病模型；8只大鼠以相同剂量尾静脉注射0.1 mol/L pH 4.0柠檬酸缓冲液作为正常对照组，建模6周后，在建模大鼠中取10只作为糖尿病模型对照组；其余60只建模大鼠右眼玻璃体腔注射移值hUCMSC细胞悬液2 μl作为实验眼，左眼玻璃体腔注射等量Dulbecco改良Eagle/F12培养基作为对照眼。注射移植后1、2、4周分别进行后续实验。实验眼记作U1、U2、U4组，对照眼记作D1、D2、D4组，每组各20只眼。摘除眼球作石蜡切片行苏木精-伊红染色，光学显微镜观察大鼠视网膜结构形态，测量视网膜外核层及内核层(INL)的厚度；冰冻切片-组织免疫荧光方法观察hUCMSC在大鼠视网膜的分布、迁移情况；实时定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测大鼠视网膜中GFAP、RHO的mRNA和蛋白相对表达量。
结果光学显微镜观察发现，正常对照组大鼠视网膜各层结构正常。糖尿病模型对照组大鼠视网膜神经纤维层(NFL)变薄，视网膜神经节细胞(RGC)数量减少。U1、D1组大鼠RGC数量减少、排列紊乱；U2、U4、D2、D4组大鼠RGC数量不断减少。与D4组比较，U4组大鼠视网膜INL厚度明显增加，差异有统计学意义(P<0.05)。冰冻切片-组织免疫荧光实验结果显示，U1组大鼠视网膜可见沿内界膜分布的hUCMSC；U2组大鼠视网膜hUCMSC数量逐渐减少，主要位于NFL和神经节细胞层。实时定量PCR及Western blot检测结果显示，随建模时间延长，糖尿病模型对照组及D1、D2、D4组大鼠视网膜中GFAP mRNA、蛋白相对表达量逐渐升高，RHO mRNA、蛋白相对表达量逐渐降低。分别与D2、D4组比较，U2、U4组大鼠视网膜GFAP mRNA、蛋白相对表达量均降低，RHO mRNA、蛋白相对表达量均升高，差异有统计学意义(P<0.01)。
结论hUCMSC移植到糖尿病大鼠玻璃体腔后能够迁移、整合至视网膜；可降低GFAP表达，提高RHO表达。