【摘 要】
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] 目的研究针对血小板衍生生长因子(PDGF)受体β亚单位基因的核酶的制备与体外切割活性鉴定. 方法将大鼠PDGF受体β亚单位基因的PCR片段克隆于T载体T7启动子下游,32P标记的体
【机 构】
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上海第二军医大学长征医院消化科;上海第二军医大学国际肿瘤合作研究所;上海中国科学院上海生物化学研究所
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] 目的研究针对血小板衍生生长因子(PDGF)受体β亚单位基因的核酶的制备与体外切割活性鉴定. 方法将大鼠PDGF受体β亚单位基因的PCR片段克隆于T载体T7启动子下游,32P标记的体外转录物作为靶RNA;设计并合成针对大鼠PDGF受体β亚单位胞外区的核酶,将核酶基因克隆于自我切割核酶载体P1.5的5′-cis核酶和3′-cis核酶之间,并进行32P标记的转录.核酶与靶RNA按一定比例和条件进行切割反应电泳,放射自显影. 结果核酶制备正确,在最适条件下具有切割活性.其Km＝13.20nM,Kcat＝0.28min-1.最高切割效率达78.3%. 结论体外制备的核酶具有良好的特异催化切割活性.[
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