目的 建立二维超高效液相色谱-Qtof质谱联用研究注射用盐酸万古霉素杂质谱的方法，对比仿制制剂与参比制剂杂质谱一致性。方法 通过二维液相色谱在线脱盐技术，在不改变一维液相色谱条件的基础上，将目标化合物通过阀切换转换至二维液相色谱柱，在二维液相流动相的带动下进质谱，进行结构鉴定。一维色谱柱为ACQUITY UPLC CSHTM C18（150 mm×2.1 mm,1.7μm），流动相A为乙腈-甲醇-溶液A（3∶4∶93,V/V/V），流动相B为乙腈-甲醇-溶液A（10∶40∶50,V/V/V），溶液A为称取7.0 g Tris至约950 ml水中，经20%乙酸溶液（V/V）调节pH至约8.22，用水定容至1 000 ml制得，检测波长为280 nm；二维液相色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18（50 mm×2.1 mm,1.7μm），流动相A为0.1%甲酸水溶液，流动相B为乙腈；采用ESI离子化模式进行质谱扫描，离子源温度120℃，雾化气温度500℃，雾化气流速900 L/h，采集模式为MSE及MSMS。结果 对样品中存在的杂质进行分析，确认9个已知杂质与参比制剂结构一致，解析出可能的未知杂质结构8个，其结构与参比制剂一致。结论 本法建立了二维超高效液相色谱-Qtof质谱联用技术测定、分析注射用盐酸万古霉素杂质的方法，可快速实现杂质定性，结合软件解析结构更便捷；国产制剂与参比制剂产品相比，杂质谱基本一致，表明该仿制制剂与参比制剂杂质水平相当。