研究青蒿琥酯(ART)体外对人巨细胞病毒(HCMV)实验室标准株及耐药株的抗病毒作用,了解分次给药法是否能增强ART抗病毒效应。
方法1.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定ART的细胞毒性,计算ART对人胚肺成纤维细胞(HEL)的最大无毒浓度(TC0)与半数中毒浓度(TC50)。2.ART抗HCMV作用检测:以HCMV标准株及耐药株感染HEL后,再加入含有不同浓度ART的新鲜培养基,设更昔洛韦(GCV)对照、细胞对照和病毒对照,培养7~10 d,待病毒对照组病变达+++~++++时,采用MTT比色法测定OD490值,计算受试药物病毒抑制率,Probit回归法计算药物对HCMV的半数抑制浓度(IC50)。3.测定ART分次给药对HCMV AD169株的抗病毒效应:实验分3组,1组:药物总量一次性给予;2组:药物总量分3次,每天给药1次;3组:药物总量分6次,每天给药3次。以GCV组作为对照,MTT法测定各组OD490值,并计算各药物浓度组的病毒抑制率,采用SPSS 18.0统计软件,对各组OD值进行单因素方差分析,比较各组间差异。
结果1.ART在62.5 μmol/L以内未见明显细胞毒性作用,TC0和TC50分别为62.5 μmol/L和171.7 μmol/L。2.在5 μmol/L、15 μmol/L及30 μmol/L时,ART与GCV对HCMV AD169株生长均有明显的抑制作用,二者比较差异无统计学意义,其中GCV IC50为3.49 μmol/L,而ART IC50为2.17 μmol/L,ART治疗指数为28.8,GCV治疗指数为716.3。另外,ART对HCMV耐药株生长仍有明显的抑制作用,而GCV抑制作用明显下降,二者比较差异有统计学意义,其中GCV IC50为44.4 μmol/L,ART IC50为2.5 μmol/L。3.在15 μmol/L及30 μmol/L浓度下,ART每天2次给药较每天1次给药及单次给药,对病毒的抑制率有显著提高,差异有统计学意义(P<0.01);而GCV同样按上述方法给药,则对病毒抑制率影响不大(P>0.05)。
结论1.ART浓度在62.5 μmol/L以下时,对HEL无明显毒性。2.ART对HCMV标准株及耐药株均有明显的抗病毒效应。3.ART每天分次给药比单次给药及一次给药更能发挥其抗病毒作用。4.ART不良反应轻微,加上其与现有抗HCMV药物可能不同的独特的抗病毒作用机制,临床应用不易产生耐药性,因此非常有望成为新一代的抗HCMV药物。