【摘 要】
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目的：构建基于逆转录微滴式聚合酶链式反应（reverse transcriptase droplet digital polymerase chain reaction,RT-ddPCR）技术的食品中诺如病毒（norovirus,NoV）定量检测方法。方法：筛选引物探针，建立并优化GI、GII型NoV和MS2噬菌体一步法RT-ddPCR检测体系，确定特异性。利用NoV RNA标准物质和MS2噬菌体
【基金项目】
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“十三五”国家重点研发计划重点专项（2017YFC1601602）；
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目的：构建基于逆转录微滴式聚合酶链式反应（reverse transcriptase droplet digital polymerase chain reaction,RT-ddPCR）技术的食品中诺如病毒（norovirus,NoV）定量检测方法。方法：筛选引物探针，建立并优化GI、GII型NoV和MS2噬菌体一步法RT-ddPCR检测体系，确定特异性。利用NoV RNA标准物质和MS2噬菌体RNA确认RT-ddPCR检测体系的定量限、准确度和重复性。制备人工阳性样品，分析MS2噬菌体对定量结果的影响。结果：3个RT-ddPCR检测体系具有良好的特异性、准确度和重复性，NoV RT-ddPCR检测体系的定量限包含10~4～10~0拷贝/μL?5?个数量级，MS2噬菌体RT-ddPCR检测体系定量限与NoV相当，添加与不添加MS2噬菌体的人工阳性样品的定量结果无显著差异（P≥0.05）。结论：NoV RT-ddPCR检测体系可准确定量NoV RNA,MS2噬菌体不影响定量结果，可作为过程控制的模式病毒被添加到食品中，指示回收率，计算食品中NoV实际载量。
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