【摘 要】
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目的表达纯化人呼吸道合胞病毒(HRSV)F蛋白基因片段,建立间接夹心酶联免疫吸附分析法(ELISA),为进一步大量表达F基因、构建基因工程疫苗和快速临床检测奠定基础。方法逆转录
【基金项目】
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吉林省科技厅课题(200705209)
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目的表达纯化人呼吸道合胞病毒(HRSV)F蛋白基因片段,建立间接夹心酶联免疫吸附分析法(ELISA),为进一步大量表达F基因、构建基因工程疫苗和快速临床检测奠定基础。方法逆转录并扩增F基因中的F1片段,连接到载体中,转染真核细胞,诱导并纯化重组F蛋白。将纯化重组F蛋白免疫小鼠制备抗体血清,并建立间接夹心ELISA。通过100份标本应用"金标法"对所建立的方法进行验证。结果成功获得F基因中F1片段的扩增产物,筛选阳性克隆,得到相对分子质量为45000的大量表达蛋白。确定了间接夹心ELISA的最佳反应条件和工作浓度;鼠抗F1IgG最佳质量浓度为3.2μg/mL,样品最佳反应时间为37℃70 min,酶标兔抗鼠IgG最佳工作浓度为1∶6 000。与"金标法"对比,阳性样品的变异系数为3.2%～8.6%,阴性样品的变异系数为5.1%～8.3%,均小于10.0%,表明该方法有良好的重复性。结论构建的重组真核细胞能够大量表达F蛋白,纯化的F蛋白具有很好的免疫原性,制备的抗体血清用于ELISA能够得到准确的检测结果。
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