【摘 要】
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目的 克隆并表达肺炎链球菌青霉素结合蛋白PBP1a,探讨其对青霉素耐药的影响. 方法 化学合成肺炎链球菌含STMK区的pbp1a基因片段,PCR扩增后进行1.0％琼脂糖凝胶电泳鉴定.将扩增
【机 构】
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重庆市肿瘤研究所,重庆,400030;重庆医科大学基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室,重庆,400016
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目的 克隆并表达肺炎链球菌青霉素结合蛋白PBP1a,探讨其对青霉素耐药的影响. 方法 化学合成肺炎链球菌含STMK区的pbp1a基因片段,PCR扩增后进行1.0％琼脂糖凝胶电泳鉴定.将扩增的pbp1a基因连接pUC19载体,构建重组质粒pUC19-pbp1a,转化DH5α,PCR扩增后进行1.5％琼脂糖电泳分析和DNA测序鉴定.将pUC19-pbp1a转化对青霉素敏感、中度敏感和耐药,并存在不同的pbp1a、pbp2b突变的肺炎链球菌,SDS-PAGE分析PBP1a的表达,并测定青霉素对转化菌的MIC. 结果 pbp1a基因扩增产物经琼脂糖凝胶电泳为330 bp,大小与预期一致.重组质粒基因全长为360 bp,扩增产物约330 bp,测序无碱基缺失、插入等突变.重组质粒转化存在不同的pbp1a、pbp2b突变和对青霉素不同敏感性的肺炎链球菌后,大量表达约110 ku蛋白,其中对青霉素敏感和中度敏感的无pbp1a突变株MIC无变化,对中度敏感菌中的pbp1a突变株MIC略有变化,对存在pbp1a突变的耐药菌株MIC显著降低(P＜0.01). 结论 在肺炎链球菌中成功表达了青霉素结合蛋白PBP1a,可使其对青霉素的耐药性显著降低.
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