【摘 要】
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目的 为了进一步研究PES1的生物学功能,采用Tet-on系统构建可诱导稳定表达PES1的卵巢癌细胞株SKOV3.方法 采用PCR技术将PES1克隆到pTRE-Tight载体中,并进行表达鉴定.将调控质粒pTet-on转染卵巢癌细胞,经G418筛选后再转染pTRE-Tigh1-PES1,然后经潮霉素筛选出阳性克隆.用不同浓度的强力霉素(Dox)进行诱导后,Western blot确定Dox的最佳诱
【机 构】
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350003福州,武警福建总队医院检验科,350003福州,武警福建总队医院检验科,南京军区福州总医院检验医学研究所,350003福州,武警福建总队医院检验科,350003福州,武警福建总队医院检验科
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目的 为了进一步研究PES1的生物学功能,采用Tet-on系统构建可诱导稳定表达PES1的卵巢癌细胞株SKOV3.方法 采用PCR技术将PES1克隆到pTRE-Tight载体中,并进行表达鉴定.将调控质粒pTet-on转染卵巢癌细胞,经G418筛选后再转染pTRE-Tigh1-PES1,然后经潮霉素筛选出阳性克隆.用不同浓度的强力霉素(Dox)进行诱导后,Western blot确定Dox的最佳诱导浓度.结晶紫实验观察Dox诱导的稳定转染pTRE-Tight-PES1的SKOV3细胞生长速度.结果 将成功构建的pTRE-Tight-PES1转染SKOV3细胞后,经过筛选获得Dox可诱导表达PES1的SKOV3细胞克隆.浓度低于2 mg/L的Dox可以剂量依赖性地诱导PES1表达,2 mg/L可以诱导PES1高表达.Dox诱导的转染pTRE-Tight和未转染任何质粒的SKOV3生长速度无明显差异,而转染pTRE-Tight-PES1的SKOV3细胞比转染pTRE-Tight和未转染任何质粒的细胞在第4天时生长速度明显更快(P=0.001).结论 成功建立了可诱导表达PES1的SKOV3细胞,为研究PES1的生物学功能提供了有效的细胞模型.PES1表达可以增强SKOV3细胞的生长。
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