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介绍了一种基于小多肽库的高效液相色谱手性固定相（CSP）的制备．胰蛋白酶酶解牛血清白蛋白（BSA）的优化条件为：在pH8．2，37℃下，酶解6h，所得到的小多肽库以最大截留分子量（MWCO）为6000的超滤膜过滤，滤液为含分子量小于6000的多肽分子库，以羰基咪唑法将该小多肽库键合至氨基化硅胶上。与完整蛋白-CSP相比，该多肽-CSP拥有更高的多肽键合密度以及更好的稳定性。对流动相组成以及pH对保留和立体选择性的影响也进行了考察，在优化的条件下，D，L-色氨酸、D，L-酪氨酸以及手性药物R，S-盐酸苯海索