肠出血型大肠埃希菌O157:H7 espF基因缺失株和回补株的构建

来源 :南方医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：hsjxln

【摘要】

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目的利用Red同源重组系统敲除肠出血型大肠埃希菌的esp F基因及其核苷酸片段;建立以p BAD 33质粒为载体的esp F基因回补实验平台。方法设计1对同源臂引物扩增卡那霉素抗性打

【作者】

：

华颖孙琦王湘雨杜艳丽邵娜张其威赵卫万成松

【机构】

：

南方医科大学公共卫生与热带医学学院BsL-3实验室

【出处】

：

南方医科大学学报

【发表日期】

：

2015年11期

【关键词】

：

大肠埃希菌 espF基因同源重组突变株基因回补

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目的利用Red同源重组系统敲除肠出血型大肠埃希菌的esp F基因及其核苷酸片段;建立以p BAD 33质粒为载体的esp F基因回补实验平台。方法设计1对同源臂引物扩增卡那霉素抗性打靶片段,将抗性打靶片段电转入含有PKD46质粒的EDL933w,在PKD 46介导的重组系统帮助下,打靶片段和菌体esp F基因发生同源重组,PCR和测序验证;PCR扩增esp F及其核苷酸片段的整个ORF区序列,将其克隆入p BAD33质粒,分别将重组质粒转入相应的缺失株,以构建出相应的回补突变株。采用RT-PCR的方法验证

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