【摘 要】
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目的 获得粉尘螨变应原第16组分(Der f 16)编码基因并构建其原核表达体系.方法 提取粉尘螨总RNA,根据GenBank (AF465625)设计并合成引物,经RT-PCR合成Der f 16全长基因,克隆
【机 构】
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南京医科大学免疫学系,江苏南京210029;盐城卫生职业技术学院,江苏盐城224005;盐城卫生职业技术学院,江苏盐城,224005;南京医科大学免疫学系,江苏南京,210029
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目的 获得粉尘螨变应原第16组分(Der f 16)编码基因并构建其原核表达体系.方法 提取粉尘螨总RNA,根据GenBank (AF465625)设计并合成引物,经RT-PCR合成Der f 16全长基因,克隆至pCold TF DNA载体,热转化至E.coli JM109;将测序正确的pCold TF- Der f 16质粒转化BL21 (DE3),IPTG诱导表达,并用SDS PAGE验证产物.结果 RT PCR扩增获得目的基因Der f 16,全长1 443 bp,与参考序列同源性99.72％.将构建的pCold TF-Der f16质粒转化宿主菌E.coli BL21后进行诱导,SDS-PAGE电泳显示其全细胞、上清及沉淀物均有蛋白表达,且上清表达量高于沉淀物.生物信息学分析显示该重组蛋白由480个氨基酸组成,分子质量单位为55.1315 ku,二级结构由(-螺旋(35.21％)、延伸主链(20.83％)和无规卷曲(43.96％)组成.该变应原含有4个凝溶胶蛋白位点.结论 粉尘螨变应原第16组分原核表达获得成功,为进一步规模生产该变应原并应用于临床诊治奠定了基础.
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