干扰素调节因子1调控线粒体自噬参与小鼠肝缺血再灌注损伤

来源 :中华器官移植杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhut2009
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目的

探讨干扰素调节因子-1(IRF-1)调控线粒体自噬对小鼠肝缺血再灌注损伤的影响。

方法

选择健康雄性C57BL/6小鼠建立活体小鼠肝缺血再灌注损伤模型,用随机数字表法分为假手术组(sham)和缺血再灌注组(IR),每组6只。血生化检测两组小鼠血清ALT、AST变化,罗丹明123染色(Rhodamine 123)法检测肝细胞线粒体损伤情况,HE染色观察肝组织病理学改变,TUNEL法检测肝细胞凋亡情况。Western blot检测IRF-1、Nix、LC3和Caspase-3蛋白表达。AML12细胞系建立离体肝细胞缺血再灌注损伤模型,分为siRNA-NC组和siIRF-1组。PI染色法检测AML12细胞凋亡情况,免疫荧光观察AML12细胞内自噬体形成情况,Western blot检测IRF-1、Nix、LC3和Bax蛋白表达。

结果

与假手术组比较,缺血再灌注组小鼠血清ALT、AST明显升高(P<0.0001);罗丹明123染色法见缺血再灌注组线粒体膜电位明显下降,线粒体损伤严重;病理学检查见缺血再灌注组肝细胞肿胀、脂肪变性,肝窦狭窄,中性粒细胞浸润和片状坏死,肝组织结构破坏严重;TUNEL法检测见IR组肝细胞凋亡率明显增高(P<0.0001);Western blot检测显示,缺血再灌注组IRF-1、Caspase-3蛋白表达水平明显高于假手术组,Nix、LC3Ⅱ表达水平明显低于假手术组。PI染色法示,SiRNA-NC组细胞凋亡率明显高于siIRF-1组(P<0.0001)。免疫荧光示SiRNA-NC组细胞内自噬体个数明显低于siIRF-1组(P<0.0001);Western blot检测显示SiRNA-NC组IRF-1、Bax蛋白表达水平明显高于siIRF-1组,Nix、LC3Ⅱ表达水平明显低于siIRF-1组。

结论

IRF-1加重小鼠肝缺血再灌注损伤,其机制可能与IRF-1抑制线粒体自噬,促进肝细胞凋亡有关。抑制IRF-1表达能够提高线粒体自噬,对肝缺血再灌注起到保护作用。

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