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安徽省旌德县林业局旌阳镇林业站 安徽旌德 242600
【摘 要】山茶，属于山茶科山茶花属，为中国传统十大名花之一。因其植株形姿优美，叶浓绿而光泽，花形艳丽缤纷，花色繁多，花姿丰盈，而受到世界园艺界的珍视。常近几年来，很多地区栽培的茶花常受到炭疽病侵害，导致叶片脱落，花期不一致，花质量差，严重影响了山茶花的观赏价值。本文主要从营养、pH值、温度、光照条件方面对山茶炭疽病病菌进行了生物学特性研究，同时对防治炭疽病效果较好的3种常规的广谱性杀菌剂进行了室内的毒力测定，这将会为山茶花炭疽病的病害防治提供理论依据。
【关键词】山茶炭疽病；生物学特性；毒力测定
1 材料与方法
1.1菌株来源
2014年3月对采至于旌德县振宇花木有限公司的山茶炭疽病病叶，进行显微鉴定，确定其病原为山茶炭疽病菌，属半知菌亚门腔孢纲黑盘孢目黑盘孢科炭疽菌属。并采用组织分离法对病原菌进行了分离培养，获得纯菌株。
1.2营养对菌落径向生长的影响
将直径4cm菌丝块接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）、燕麦芽汁琼脂培养基（MA）、麦片琼脂培养基（OA）平板上，置光照培养箱中，25℃温恒培养，每个处理设3个重复。每天测量不同培养基上的菌落直径，并记录菌落特征，以了解同一菌种在不同培养基上的培养性状。菌培
1.3 pH值对菌落生长的影响
用0.1mol/L HCl和0.1mol/L NaOH溶液将经高温灭菌后的PDA培养基的pH分别调至2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0，将直径4cm菌丝块接种后置于25℃恒温培养，共10个处理，每个处理3次重复，每天测量各菌落直径，观察记录菌落培养性状，并确定菌落生长最适pH值。
1.4温度对菌落生长的影响
将直径4cm菌丝块接种到PDA平板上，分别置于5℃、10℃、15℃、20℃、24℃、25℃、26℃、28℃、30℃、35℃下恒温培养，每个处理3次重复，每天测量菌落直径，观察记录菌落培养性状，并确定菌落生长的最适和极限温度。
1.5光照对菌落径向生长的影响
将分离到的目的菌定量接种到PDA培养基上，分别在室内漫射光—黑暗自然交替、全光照、全黑暗下，25℃恒温培养。每个处理3次重复，每天测量各菌落直径。
1.6不同杀菌剂对病原菌菌丝生长的毒力测定
1.6.1 药剂及含药培养基的配制
表1 供试药剂和使用浓度
杀菌剂 生产厂家 使用浓度（μg/ml）
70%甲基托布津WP 江苏农垦农药有限公司 1000，100，10，1，0.1
75%百菌清WP 陕西亿农高科药业有限公司 1500，150，15，1.5，0.15
50%多菌灵WP 河北冠龙农化有限公司 1000，100，10，1，0.1
注：WP为可湿性粉剂
在无菌操作条件下，将各药剂分别配制成所需10倍质量浓度备用。取18 mL的MA培养基倒入试管（18×180mm）中，高压灭菌后冷却至50-60℃，用移液枪吸取2 mL上述药剂注入试管中，摇匀后倒入灭菌过的培养皿中，制成含毒平板。
采用含毒介质生长速率法[1-3]，用直径为4 mm的打孔器移取培养6 d的较为一致的菌落边缘，接种于经不同药剂处理的含毒培养平板中，每处理重复3次，置于25℃光照培养箱中培养。6d后采用十字交叉法测量菌落生长直径，以加入无菌水的培养基为对照，并求出各种化学药剂的抑菌率。
2结果与分析
2.1 不同PH值对菌落生长的影响
培养基的酸碱度大小对菌落生长影响较大，由从图1可知，在pH值为3～8时，病菌均可生长，其生长适宜pH值为4～6，生长的最适pH值为6。在pH值为5时，培养6d，菌落直径可达71mm。在pH2和pH9时，茶花炭疽病病原菌菌落几乎不生长，说明病原菌喜偏酸环境
2.2温度对菌落生长的影响
图2为在不同温度下培养6天后山茶炭疽病病原菌菌落的平均生长速度，在5℃与35℃时，菌丝生长缓慢，低于5℃和超过35℃时菌丝几乎停止生长。温度对山茶炭疽病菌落生长的影响较大，该菌生长的温度范围为5-35℃，适宜温度为24-30℃之间，最适温度为26℃。
2.3 不同光照条件对菌落生长的影响
表2 不同光照条件对山茶花炭疽病菌菌落生长的影响
光照条件 菌落平均直径（mm）
1d 2d 3d 4d 5d 6d
全光照 7.1 21.8 42.9 53.8 67.2 76.1
全黑暗 6.9 21.0 41.6 53.6 63.6 76.3
自然漫射光/黑暗交替 6.5 20.6 40.3 52.6 64 75.3
由上表可知，病原菌在三种处理中均能生长，并且不同光照条件对菌落生长的影响相差不大。
2.4 病菌的药剂毒力测定
表3 各杀菌剂对山茶花炭疽病菌的毒力方程及EC50
药剂 毒力回归方程 相关系数（R2） 抑制中浓度EC50（μg/ml）
70%甲基托布津 Y=3.0914x-2.7537 0.9378 32.22
75%百菌清 Y=0.8301x+2.6815 0.9508 62.09
l50%多菌灵 Y=1.5832x+1.1224 0.9364 28.13
药剂的毒力测定结果表明，50%多菌灵的EC50为28.13μg/ml，抑制效果最好，其次为70%甲基托布津，其EC50为32.22μg/ml，75%百菌清的EC50为62.09μg/ml，其抑制效果最差。
3结论与讨论
茶花炭疽病的发生与温度和湿度有密切关系，其生长适宜温度为24～30℃，这与它发病适温25～28℃是相一致的。当温度适宜，湿度增加时，特别是连续降雨时，能促进病害的蔓延和发展。一般4月份开始发病，6～7月份病害达到高峰，9月份以后病情趋向停止。
茶花炭疽病的发病有其自身原因，也有外界因素影响。内在因素主要指山茶花品种，而外界因素主要是季节、气候、立地条件、土质等。就品种而言，有的品种因叶片较大、薄，枝叶排列紧密，透光透气性差，当烈日曝晒、遭受狂风暴雨时，枝、叶受到伤害，而风雨带来的病菌就容易侵入感染植株，造成感病。而枝叶较稀疏、叶片较小的品种发病率很低。同一品种，外界因素发生改变，其发病率也会不同，幼树和老树因树体较弱，抗病力也就不如根系发达、生长茂盛的壮树。季节变化伴随温度变化，风雨出现的频率和强度变化，病原菌孢子的活跃度发生变化，植株感染病菌的几率也会有差异，东春季节发病率较低，夏秋季节发病率较高。
山茶花是观花赏叶植物，其花蕾形成期在每年的5～7月，而这个时期正是炭疽病病原菌最活跃的阶段，加上这个时期特有的高温热带风暴/梅雨等天气因素，导致枝叶发病率高，叶片受损脱落，严重影响花蕾的形成，影响植株的观赏价值。因此，根据对茶花炭疽病病原物生物学特性的研究，为避免或减轻炭疽病的危害，生产上要实施高温遮阳，风暴挡风，肥水管管理和抚育垦复到位，配合农药防治，及时清除病枝、病叶、徙长枝，确保山茶花正常生长、开花。
参考文献：
[1] 高智辉，王云果，韩丽等.几种杀菌剂对南方红豆杉炭疽病的室内毒力测定[J].山西农业科学，2010，38（8）：53-56.
[2] 李小霞，肖仲久.贵州省辣椒炭疽病病原菌鉴定及室内毒力测定[J].广东农业科学，2011，17：55-58.
【摘 要】山茶，属于山茶科山茶花属，为中国传统十大名花之一。因其植株形姿优美，叶浓绿而光泽，花形艳丽缤纷，花色繁多，花姿丰盈，而受到世界园艺界的珍视。常近几年来，很多地区栽培的茶花常受到炭疽病侵害，导致叶片脱落，花期不一致，花质量差，严重影响了山茶花的观赏价值。本文主要从营养、pH值、温度、光照条件方面对山茶炭疽病病菌进行了生物学特性研究，同时对防治炭疽病效果较好的3种常规的广谱性杀菌剂进行了室内的毒力测定，这将会为山茶花炭疽病的病害防治提供理论依据。
【关键词】山茶炭疽病；生物学特性；毒力测定
1 材料与方法
1.1菌株来源
2014年3月对采至于旌德县振宇花木有限公司的山茶炭疽病病叶，进行显微鉴定，确定其病原为山茶炭疽病菌，属半知菌亚门腔孢纲黑盘孢目黑盘孢科炭疽菌属。并采用组织分离法对病原菌进行了分离培养，获得纯菌株。
1.2营养对菌落径向生长的影响
将直径4cm菌丝块接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）、燕麦芽汁琼脂培养基（MA）、麦片琼脂培养基（OA）平板上，置光照培养箱中，25℃温恒培养，每个处理设3个重复。每天测量不同培养基上的菌落直径，并记录菌落特征，以了解同一菌种在不同培养基上的培养性状。菌培
1.3 pH值对菌落生长的影响
用0.1mol/L HCl和0.1mol/L NaOH溶液将经高温灭菌后的PDA培养基的pH分别调至2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0，将直径4cm菌丝块接种后置于25℃恒温培养，共10个处理，每个处理3次重复，每天测量各菌落直径，观察记录菌落培养性状，并确定菌落生长最适pH值。
1.4温度对菌落生长的影响
将直径4cm菌丝块接种到PDA平板上，分别置于5℃、10℃、15℃、20℃、24℃、25℃、26℃、28℃、30℃、35℃下恒温培养，每个处理3次重复，每天测量菌落直径，观察记录菌落培养性状，并确定菌落生长的最适和极限温度。
1.5光照对菌落径向生长的影响
将分离到的目的菌定量接种到PDA培养基上，分别在室内漫射光—黑暗自然交替、全光照、全黑暗下，25℃恒温培养。每个处理3次重复，每天测量各菌落直径。
1.6不同杀菌剂对病原菌菌丝生长的毒力测定
1.6.1 药剂及含药培养基的配制
表1 供试药剂和使用浓度
杀菌剂 生产厂家 使用浓度（μg/ml）
70%甲基托布津WP 江苏农垦农药有限公司 1000，100，10，1，0.1
75%百菌清WP 陕西亿农高科药业有限公司 1500，150，15，1.5，0.15
50%多菌灵WP 河北冠龙农化有限公司 1000，100，10，1，0.1
注：WP为可湿性粉剂
在无菌操作条件下，将各药剂分别配制成所需10倍质量浓度备用。取18 mL的MA培养基倒入试管（18×180mm）中，高压灭菌后冷却至50-60℃，用移液枪吸取2 mL上述药剂注入试管中，摇匀后倒入灭菌过的培养皿中，制成含毒平板。
采用含毒介质生长速率法[1-3]，用直径为4 mm的打孔器移取培养6 d的较为一致的菌落边缘，接种于经不同药剂处理的含毒培养平板中，每处理重复3次，置于25℃光照培养箱中培养。6d后采用十字交叉法测量菌落生长直径，以加入无菌水的培养基为对照，并求出各种化学药剂的抑菌率。
2结果与分析
2.1 不同PH值对菌落生长的影响
培养基的酸碱度大小对菌落生长影响较大，由从图1可知，在pH值为3～8时，病菌均可生长，其生长适宜pH值为4～6，生长的最适pH值为6。在pH值为5时，培养6d，菌落直径可达71mm。在pH2和pH9时，茶花炭疽病病原菌菌落几乎不生长，说明病原菌喜偏酸环境
2.2温度对菌落生长的影响
图2为在不同温度下培养6天后山茶炭疽病病原菌菌落的平均生长速度，在5℃与35℃时，菌丝生长缓慢，低于5℃和超过35℃时菌丝几乎停止生长。温度对山茶炭疽病菌落生长的影响较大，该菌生长的温度范围为5-35℃，适宜温度为24-30℃之间，最适温度为26℃。
2.3 不同光照条件对菌落生长的影响
表2 不同光照条件对山茶花炭疽病菌菌落生长的影响
光照条件 菌落平均直径（mm）
1d 2d 3d 4d 5d 6d
全光照 7.1 21.8 42.9 53.8 67.2 76.1
全黑暗 6.9 21.0 41.6 53.6 63.6 76.3
自然漫射光/黑暗交替 6.5 20.6 40.3 52.6 64 75.3
由上表可知，病原菌在三种处理中均能生长，并且不同光照条件对菌落生长的影响相差不大。
2.4 病菌的药剂毒力测定
表3 各杀菌剂对山茶花炭疽病菌的毒力方程及EC50
药剂 毒力回归方程 相关系数（R2） 抑制中浓度EC50（μg/ml）
70%甲基托布津 Y=3.0914x-2.7537 0.9378 32.22
75%百菌清 Y=0.8301x+2.6815 0.9508 62.09
l50%多菌灵 Y=1.5832x+1.1224 0.9364 28.13
药剂的毒力测定结果表明，50%多菌灵的EC50为28.13μg/ml，抑制效果最好，其次为70%甲基托布津，其EC50为32.22μg/ml，75%百菌清的EC50为62.09μg/ml，其抑制效果最差。
3结论与讨论
茶花炭疽病的发生与温度和湿度有密切关系，其生长适宜温度为24～30℃，这与它发病适温25～28℃是相一致的。当温度适宜，湿度增加时，特别是连续降雨时，能促进病害的蔓延和发展。一般4月份开始发病，6～7月份病害达到高峰，9月份以后病情趋向停止。
茶花炭疽病的发病有其自身原因，也有外界因素影响。内在因素主要指山茶花品种，而外界因素主要是季节、气候、立地条件、土质等。就品种而言，有的品种因叶片较大、薄，枝叶排列紧密，透光透气性差，当烈日曝晒、遭受狂风暴雨时，枝、叶受到伤害，而风雨带来的病菌就容易侵入感染植株，造成感病。而枝叶较稀疏、叶片较小的品种发病率很低。同一品种，外界因素发生改变，其发病率也会不同，幼树和老树因树体较弱，抗病力也就不如根系发达、生长茂盛的壮树。季节变化伴随温度变化，风雨出现的频率和强度变化，病原菌孢子的活跃度发生变化，植株感染病菌的几率也会有差异，东春季节发病率较低，夏秋季节发病率较高。
山茶花是观花赏叶植物，其花蕾形成期在每年的5～7月，而这个时期正是炭疽病病原菌最活跃的阶段，加上这个时期特有的高温热带风暴/梅雨等天气因素，导致枝叶发病率高，叶片受损脱落，严重影响花蕾的形成，影响植株的观赏价值。因此，根据对茶花炭疽病病原物生物学特性的研究，为避免或减轻炭疽病的危害，生产上要实施高温遮阳，风暴挡风，肥水管管理和抚育垦复到位，配合农药防治，及时清除病枝、病叶、徙长枝，确保山茶花正常生长、开花。
参考文献：
[1] 高智辉，王云果，韩丽等.几种杀菌剂对南方红豆杉炭疽病的室内毒力测定[J].山西农业科学，2010，38（8）：53-56.
[2] 李小霞，肖仲久.贵州省辣椒炭疽病病原菌鉴定及室内毒力测定[J].广东农业科学，2011，17：55-58.