【摘 要】
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目的:在肠毒素性大肠杆菌CS3菌毛表面构建 10肽随机肽库.方法:首先将原有的单酶切CS3菌毛呈现载体改造为双酶切载体,并证实改造后的载体能正确形成CS3菌毛.同时设计合成2条寡核
【机 构】
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中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所
【基金项目】
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国家高技术研究发展863计划项目.No.21004AA215212
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目的:在肠毒素性大肠杆菌CS3菌毛表面构建 10肽随机肽库.方法:首先将原有的单酶切CS3菌毛呈现载体改造为双酶切载体,并证实改造后的载体能正确形成CS3菌毛.同时设计合成2条寡核苷酸序列,链1含有1个10肽随机编码序列(NNS)10, 链2可与链1的3′端互补.两条链经过退火、延伸、酶切和回收与经过同样酶切的呈现载体连接,连接产物纯化后分多次电击转化,获得随机肽库.随机挑选10个克隆进行测序并对测序结果进行分析.结果:获得1个库容量为1.8×106大小的随机肽库.测序结果显示,所构建肽库的基本框架与预期设计相符,4个寡核苷酸出现的频率也与理论值相接近.结论:在肠毒素性大肠杆菌CS3菌毛表面成功构建库容量为1.8×106大小的10肽随机肽库.为下一步利用肽库进行筛选奠定了基础.
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