探讨橙皮素对细颗粒物PM2.5诱导的心肌样细胞损伤是否具有保护作用及其机制。
方法将培养的大鼠心肌样细胞H9c2分为4组，即对照组、PM2.5组、橙皮素组和橙皮素+PM2.5组。对照组细胞在普通培养基中正常培养。PM2.5组，以含PM2.5 800 μg/ml的培养基进行培养。橙皮素组，先用含橙皮素40 μmol/L的培养基预处理1 h（37 ℃）后换用普通培养基正常培养。橙皮素+PM2.5组，先用含橙皮素40 μmol/L的培养基预处理1 h（37 ℃）后再以含PM2.5 800 μg/ml的培养基进行培养。处理相应的时间后，采用Annexin Ⅴ-FITC/PI双染流式细胞技术和Hoechst 33258染色检测H9c2细胞凋亡情况，采用DCFH-DA法检测H9c2细胞活性氧（ROS）的生成量，采用JC-1染色法检测H9c2细胞线粒体膜电位（MMP），采用Western blot法检测H9c2细胞凋亡相关蛋白及MAPK信号通路蛋白的表达水平。
结果（1）各组H9c2细胞的凋亡情况：流式细胞术检测结果显示，PM2.5组H9c2细胞凋亡率明显高于对照组[（48.94±3.20）%比（8.13±1.40）%，P<0.01]，橙皮素+PM2.5组H9c2细胞凋亡率[（34.80±2.21）%]虽亦明显高于对照组（P<0.01），却明显低于PM2.5组（P=0.003 2）。Hoechst 33258染色结果显示，橙皮素+PM2.5组H9c2细胞凋亡数目明显少于PM2.5组。（2）各组H9c2细胞内ROS生成量：PM2.5组H9c2细胞内ROS荧光强度明显高于对照组[（49.69±5.05）%比（10.57±1.33）%，P<0.01]，橙皮素+PM2.5组[（35.08±3.90）%]虽亦高于对照组（P<0.01），却明显低于PM2.5组（P=0.000 2）。（3）各组H9c2细胞MMP：PM2.5组H9c2细胞绿色荧光强度明显高于对照组[（20.28±4.69）%比（10.50±2.72）%，P<0.01]，橙皮素+PM2.5组[（13.41±2.89）%]虽亦高于对照组（P=0.029 4），却明显低于PM2.5组（P<0.01）。（4）各组H9c2细胞凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）和活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）的表达水平：PM2.5组H9c2细胞Bcl-2蛋白表达水平明显低于对照组[（76.94±4.52）%比100%，P=0.000 9]，橙皮素+PM2.5组[（92.95±6.82）%]虽亦低于对照组（P=0.15），却明显高于PM2.5组（P=0.027 5）。PM2.5损伤组活化的caspase-3蛋白表达水平明显高于对照组[（243.98±17.94）%比100%，P=0.000 2]，橙皮素+PM2.5组[（200.45±4.31）%]虽亦高于对照组（P<0.01），却明显低于PM2.5组（P=0.015）。（5）各组H9c2细胞磷酸化（p）-p38 MAPK和磷酸化（p）-ERK蛋白的表达水平：PM2.5组p-p38 MAPK蛋白表达水平明显高于对照组[（118.90±4.78）%比100%，P=0.002 7]，橙皮素+PM2.5组[（103.30±1.27）%]虽略高于对照组（P=0.05），却明显低于PM2.5组（P=0.01）。PM2.5组p-ERK蛋白表达水平明显高于对照组[（163.50±4.98）%比100%，P<0.01]，橙皮素+PM2.5组[（139.10±2.72）%]虽亦高于对照组（P<0.01），却明显低于PM2.5组（P=0.001 6）。
结论橙皮素对PM2.5诱导的心肌样细胞损伤具有保护作用，而其机制可能与减轻氧化应激损伤、保护线粒体功能、调节凋亡相关蛋白表达以及调控MAPK信号通路从而抑制细胞凋亡有关。