【摘 要】
：
目的 探讨核定位信号肽(NLS)在转人α1,2-岩藻糖苷转移酶(HT)基因小鼠制备中的作用.方法将受精卵随机分为3组,采用显微注射的方法制备转基因小鼠.实验组:将NLS转基因构件与人HT转基因构件同时导入细胞质;对照Ⅰ组:将人HT转基因构件导入细胞质;对照Ⅱ组:将人HT转基因构件导入细胞核.应用聚合酶链反应(PCR)、Southern杂交及逆转录(RT)-PCR等方法检测人HT基因在G0代小鼠体内
【机 构】
：
300211,天津市泌尿外科研究所,300211,天津市泌尿外科研究所,300211,天津市泌尿外科研究所,300211,天津市泌尿外科研究所,中国科学院遗传与发育生物学研究所,300211,天津市泌
论文部分内容阅读
目的 探讨核定位信号肽(NLS)在转人α1,2-岩藻糖苷转移酶(HT)基因小鼠制备中的作用.方法将受精卵随机分为3组,采用显微注射的方法制备转基因小鼠.实验组:将NLS转基因构件与人HT转基因构件同时导入细胞质;对照Ⅰ组:将人HT转基因构件导入细胞质;对照Ⅱ组:将人HT转基因构件导入细胞核.应用聚合酶链反应(PCR)、Southern杂交及逆转录(RT)-PCR等方法检测人HT基因在G0代小鼠体内的整合与表达,应用流式细胞计数(FCM)检测转基因小鼠外周血单核细胞(PBMCs)表面H抗原与α-Gal抗原的表达.结果实验组与对照Ⅰ组G0代小鼠的出生率33.8%(46/136)及35.4%(23/65)高于对照Ⅱ组10.2%(51/498)(P＜0.01),实验组人HT基因的整合率(30.4%,14/46)高于对照Ⅰ组(0,0/23)与对照Ⅱ组(11.8%,6/51,P＜0.01),实验组人HT基因的表达率(19.6%,9/46)也高于对照Ⅰ组(0,0/23)和对照Ⅱ组(5.9%,3/51,P＜0.01),人HT mRNA在小鼠心、肝、肾和骨骼肌组织中均表达阳性.转基因小鼠PBMCs表面H抗原表达阳性,表达强度为人的85%～190%,同时α-Gal抗原表达显著降低,为正常小鼠的5%～12%.转基因小鼠已经稳定传3代.结论NLS基因与目的基因细胞质共注射是制备转基因小鼠简便实用的新方法。
其他文献
远程医疗作为一种病人健康监护手段受到了越来越多的重视。在各类监护参数中,心脏的活动是一个至关重要的生理参数,特别是对患有严重心血管病的病人。为了阻止病人的病情恶化
目的探讨早期胃癌术后复发转移的临床病理特点及预后因素。方法回顾性分析77例早期胃癌外科治疗的临床及病理资料。结果在早期胃癌中,淋巴结阳性患者较淋巴结阴性患者的复发
国际人类细胞分化分子(HCDM)执行委员会会议于2006年5月下旬在加拿大魁北克市举行.同时在国际第23届分析细胞学学会(ISAC)期间召开了HCDM专题讨论会.笔者参加了这两个会议,现
目的:评估双频双脉冲激光联合钬激光碎石术治疗复杂性输尿管结石的疗效。方法:采用输尿管镜双频双脉冲激光联合钬激光治疗复杂性输尿管结石39例,其中输尿管结石合并息肉30例,
总结了76例急性二氧化硒气体中毒患者的急救及护理经验.体会到:统一安置患者,有利于掌握病情变化,有利于抢救患者;早期、合理应用解毒药物硫代硫酸钠,防止毒物的继续吸收,加
目的 克隆smac(the second mitochondria-derived activator of caspases,smac)基因,构建真核表达载体pcDNA3.1/smac,并转染宫颈癌HeLa细胞,探讨smac基因过表达对宫颈癌HeLa细胞γ射线敏感性的影响.方法 用RT-PCR的方法从HeLa细胞总RNA中克隆smac基因,连入pcDNA3.1载体并测序.将测序正确的pcDNA3
视网膜血管增生性肿瘤是一种好发于中老年人周边部视网膜的良性肿瘤,可为自发或继发于其他眼部疾病.临床上以伴有明显渗出的周边部视网膜血管性肿物为主要表现,多单眼发病,呈边界清楚、大小不一的单发的粉红色或黄色肿瘤样病变,周围有略微扩张的视网膜动静脉分别充当肿瘤的滋养和引流血管.荧光素眼底血管造影检查,动脉早期肿瘤快速充盈,动脉期和静脉期早期可见清晰的瘤体毛细血管网,静脉期瘤体血管明显渗漏,周围视网膜弥漫
目的 探讨腕部电烧伤的修复方法及不同皮瓣的具体应用.方法 对1990年7月至2002年7月治疗腕部电烧伤的不同修复方法进行总结.结果 采用腹部轴型皮瓣和不带主要血管的前臂皮瓣修复Ⅰ、Ⅱ型腕部电烧伤,截肢率1.92%;腹部H型双蒂皮瓣修复Ⅲ型腕部电烧伤,截肢率54.66%;Ⅳ型,放弃皮瓣治疗,全截肢.结论 胸脐皮瓣、髂腹股沟皮瓣是修复腕部Ⅰ、Ⅱ型电烧伤较好的方法;不带主要血管的前臂皮瓣修复腕部电烧伤
目的探讨轮状病毒(RV)肠炎患儿血清免疫球蛋白(Ig)和补体(C)的变化及其在发病机制中的作用。方法对2004年7月至2005年9月广东省东莞市人民医院收治的81例RV肠炎患儿及22例健
目的研究转录因子Egr-1在失血性休克复苏(HS/R)后肝脏损伤中的作用.方法利用Egr-1野生型(WT)和基因封闭型(KO)小鼠复制失血性休克复苏模型.取肝组织,RT-PCR法测定肝组织中TNF