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目的:以喉鳞状细胞癌Hep-2细胞为研究对象,应用RNAi技术特异性的抑制NF-κBp65的表达,观察其对癌细胞增殖、蛋白和mRNA表达的影响。方法:用NF-κBp65siRNA转染喉鳞状细胞癌Hep-2细胞,采用Western Blotting方法检测Hep-2细胞转染前、后NF-κBp65的蛋白表达;采用RT-PCR检测Hep-2细胞转染前、后NF-κBp65的mRNA表达水平;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况。结果:Western Blotting结果显示随着NF-κBp65siRNA作用时间的延长,蛋白表达水平逐渐降低。半定量RT-PCR结果表明,转染NF-κBp65siRNA24、48和72h后的Hep-2细胞,与未转染组的Hep-2细胞相比,NF-κBp65mRNA的表达水平逐渐下调(P<0.05);MTT法显示不同时间NF-κBp65siRNA转染Hep-2细胞后,细胞增殖活性受抑制情况与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:NF-κBp65siRNA对Hep-2细胞的增殖活性有明显的抑制作用,并且可以特异性地抑制目的基因NF-κBp65在mRNA和蛋白水平上的表达,其作用具有时间依赖性。