【摘 要】
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目的探讨沉默磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)p110β因子的表达增加氟尿嘧啶(FU)诱导人胃癌细胞凋亡的能力。方法运用RNA干扰(shRNA)技术构建携带靶向抑制PI3Kp110β分子的慢病毒载体
【机 构】
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上海交通大学医学院附属第三人民医院消化科,
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目的探讨沉默磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)p110β因子的表达增加氟尿嘧啶(FU)诱导人胃癌细胞凋亡的能力。方法运用RNA干扰(shRNA)技术构建携带靶向抑制PI3Kp110β分子的慢病毒载体LV-sh PI3Kp110β并感染人胃癌细胞株AGS(sh PI3Kp110β组),未转染的细胞为空白对照组(Con组),转染无义序列的对照慢病毒载体LV-shRNA为阴性对照组(sh NC组),荧光显微镜观察慢病毒的感染效率,RT-PCR和Western blot方法验证慢病毒感染后PI3Kp110β mRNA和蛋白在Con、shNC和shPI3Kp110β各组细胞中的表达水平,并用嘌呤霉素筛选PI3Kp110β静默的稳转细胞。在稳转细胞中和对照细胞中加入不同浓度FU分别作用24、48和72 h,通过MTT法检测Con、shNC和shPI3Kp110β各组细胞在加入氟尿嘧啶后细胞增殖的情况,并用Western blot方法检测可能涉及的凋亡相关信号分子的变化。结果慢病毒干扰RNA(shRNA)感染人胃癌细胞株AGS后,能有效下调PI3Kp110β在细胞内的表达水平并成功筛选PI3Kp110β静默的AGS稳转细胞;FU可抑制AGS细胞的增殖,其作用呈现浓度的依赖性;在该细胞中下调PI3Kp110β的表达可增加该细胞对FU抑制细胞生长的敏感性;下调胃癌细胞AGS内shPI3Kp110β分子的表达可显著增加FU诱导凋亡相关蛋白PARP的裂解,抑制Bcl-2蛋白的表达,从而促进胃癌细胞的凋亡。结论 PI3Kp110β shRNA转染人胃癌细胞AGS可有效下调该细胞中PI3Kp110β的表达,增加5-Fu抑制人胃癌细胞生长及促进其凋亡的敏感性,促进凋亡信号通路相关蛋白的活化。
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