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摘 要：研究甲苯磺酸索拉非尼在肠道吸收情况。
关键词：甲苯磺酸索拉非尼；肠灌流；肠道吸收
甲苯磺酸索拉非尼是一种新型的多靶点抗肿瘤药，主要用于无法手术治疗的晚期肾细胞癌。此药不仅抗癌效率高，而且副作用小，具有良好的临床应用前景。它是一种多激酶抑制剂，能同时抑制多种存在于细胞内和细胞表面的激酶。包括血管内皮生长因子受体-1（VEGFR-1）、血管内皮生长因子受体-2（VEGFR-2）、血管内皮生长因子受体-3（VEGFR-3）、血小板衍生生长因子受体-β（PDGFR-β）、KIT、MET、和FLT-3。由此可见，索拉非尼具有双重抗肿瘤效应，一方面，它可以通过抑制RAF/MEK/ERK信号传导通路，直接抑制肿瘤生长；另一方面，它又可通过抑制VEGFR和PDGFR而阻断肿瘤新生血管的形成，间接抑制肿瘤细胞的生长。
1 仪器、试剂与动物
1.1 仪器
1.2 试剂
K-R缓冲液，5ug/ml、10ug/ml、20ug/ml的药物灌流液，生理盐水，甲醇。
1.3 动物
SD大鼠，雌雄兼用，200-250g （青龙山动物养殖基地提供）。
2 研究方法
2.1 大鼠在体单向肠灌流实验方法[1，2，3]
实验前将大鼠禁食过夜（自由饮水），空腹注射0.2g/ml乌拉坦溶液麻醉（0.5ml/100g），固定，沿腹中线打开腹腔约3-4cm，取待考察的肠段，于两端切口，用预热至37℃的生理盐水将肠内容物冲洗干净，切口处插管结扎，装好装置。红外灯下保持37℃体温，伤口处用浸有生理盐水的脱脂棉覆盖保温。取预热至37℃的供试液适量，以0.2ml/min的流速灌流平衡30min。更换供试液，进口处用已称量过质量的装有供试液的采样管灌流，流速0.2ml/min。出口用已称量质量的收集管收集流出液并开始计时，每个15min更换供试液和收集采样管。称重，分别计算灌入的质量Min和流出的质量Mout。用HPLC法测定流出液的药物浓度。实验持续时间为105min。实验结束后将大鼠处死，剪下被灌流的各肠段，测量其长度（l）和内半径（r）。
2.2 灌流液样品的处理方法
取灌流液样品500ul，加入500ul甲醇，涡旋30秒后，12000rpm高速离心10min，按2.2.1色谱条件检测，得到A，带入图1的线性回归方程，求得各流出液的药物浓度。
2.3 数据分析方法
采用质量法[4，5]计算药物的吸收速率常数（Ka）和表观吸收系数（Papp）。
式中：V in和V out分别为灌入和收集的供试液体积（mL）（假定供试液密度为1.0kg·L-1，根据测得质量计算体积），Q 为灌流速度（0.2mLomin-1），Cin 、Cout分别为进口和出口处缓冲液中药物的质量浓度（g·L-1），l 和r 分别为被灌流肠段的长度（cm）和横截面半径（cm）。
3 药物不同肠段吸收特性的考察
3.1 实验方法
取大鼠3只，每只分别取以下肠段：十二指肠段为自幽门下1cm处开始；空肠段为自幽门15cm处开始；回肠段为自盲肠上行20cm处开始；结肠段为紧邻盲肠至直肠。各肠段均取10cm左右，方法同“2.1”，取“1.2”配制的10ug/ml药物溶液作为供试液，灌流速度为0.2mL·min-1，持续105min，每15min换液，计算并比较各肠段的Ka和Papp值，结果见表1。
3.2 结果与讨论
3.2.1
通过大鼠各肠段药物吸收的研究表明，甲苯磺酸索拉非尼在各肠段均具有较高的表观吸收系数和药物吸收速率常数。单因素方差分析进行两两比较，十二指肠与结肠Ka无显著差异（P>0.05），十二指肠与空肠Papp无显著差异（P>0.05），其它参数比较均有显著差异（P<0.05）。其吸收窗为全肠段，十二指肠和结肠吸收最好。
4 药物浓度对药物吸收的影响
4.1 试验方法
取大鼠6只，随机分为2组，分别以“1.2.2” 配制的5ug/ml和20ug/ml的药物溶液作为供试液，按3.2.1法，以空肠[9]为灌流部位，考察不同药物浓度对吸收的影响。灌流速度0.2mLomin-1，每隔15min更换供试液，持续105min，比较3种不同药物浓度下的ka和Papp值，以评价药物浓度对药物吸收的影响。结果见表2和表3。
4.2 结果与讨论
单因素方差分析进行两两比较，5ug/ml的Ka和Papp较高，且与10ug/ml和20ug/ml有显著性差异，10ug/ml和20ug/mlKa和Papp无显著性差异。表明药物在大鼠空肠段的吸收存在自身浓度抑制现象即药物在肠道的吸收存在饱和现象，提示其在体内的转运可能存在主动转运或促进扩散作用，增大药物与肠粘膜的接触面积是提高药物吸收程度的有效方法。
5 P-gp抑制剂维拉帕米对药物吸收的影响
5.1 试验方法
取大鼠3只，以加入P-gp抑制剂维拉帕米的10ug/ml药物溶液为灌流液，按3.2.1法，以空肠段作为灌流部位，考察P-gp抑制剂维拉帕米对吸收的影响。灌流速度0.2 mLomin-1，每隔15min更换供试液，持续105min，比较加入P-gp抑制剂维拉帕米和未加时的ka和Papp值，以评价P-gp抑制剂维拉帕米对药物吸收的影响。结果见表4。
5.2 结果与讨论
单因素方差分析进行两两比较，Ka和Papp均无显著性差异（P>0.05），表明药物不是P-gp抑制剂的底物。
6 结果与讨论
文献报道[6]，大鼠Papp小于0.03×10e22
cm/s（即0.18×10-3cm·min-1）和大于0.2×10-4cm/s（即1.2×10-3cm·min-1）時，分别表示药物难以吸收和易于吸收。本实验得出Papp大于1.2×10-3cm·min-1，表明甲苯磺酸索拉非尼在大鼠肠道内易于吸收。
通过研究可认为甲苯磺酸索拉非尼在肠道的吸收良好，因此不需考察吸收促进剂的对其吸收的促进作用。
参考文献
[1]洪丽娟，潘卫三，潘裕生，周彩红，颜廷旭，聂淑芳.尼美舒利大鼠在体肠吸收动力学[J].中国新药与临床杂志，2009，28（2）.
[2]许蕾，杨中林.大鼠在体单向灌流法研究橙皮苷肠道吸收性质[J].中国药学杂志，2009，44（8）.
[3]杜秋，狄留庆*，单进军，刘陶世，张新庄.在体单向肠灌流模型研究瑞香素的大肠吸收特性[J].药学学报，2009，44（8）：922-926.
[4]聂淑芳，潘卫三，杨星钢，等.对大鼠在体肠单向灌流技术中重量法的评价[J].中国新药杂志，2005，14（10）：117621179.
[5]金玲宇，张宇，马妮楠，孙彦辉，焦成美，李三鸣.盐酸文拉法辛大鼠在体肠吸收特性考察[J].中国药剂学杂志，2008，6（3）.
[6]FAGERHOLM U，JOHASSON M，LENNERNASH.Comparision beTween permeability coefficients in rat and human jejunum [J].Pharm Res，1996.13（9）：336-342.
关键词：甲苯磺酸索拉非尼；肠灌流；肠道吸收
甲苯磺酸索拉非尼是一种新型的多靶点抗肿瘤药，主要用于无法手术治疗的晚期肾细胞癌。此药不仅抗癌效率高，而且副作用小，具有良好的临床应用前景。它是一种多激酶抑制剂，能同时抑制多种存在于细胞内和细胞表面的激酶。包括血管内皮生长因子受体-1（VEGFR-1）、血管内皮生长因子受体-2（VEGFR-2）、血管内皮生长因子受体-3（VEGFR-3）、血小板衍生生长因子受体-β（PDGFR-β）、KIT、MET、和FLT-3。由此可见，索拉非尼具有双重抗肿瘤效应，一方面，它可以通过抑制RAF/MEK/ERK信号传导通路，直接抑制肿瘤生长；另一方面，它又可通过抑制VEGFR和PDGFR而阻断肿瘤新生血管的形成，间接抑制肿瘤细胞的生长。
1 仪器、试剂与动物
1.1 仪器
1.2 试剂
K-R缓冲液，5ug/ml、10ug/ml、20ug/ml的药物灌流液，生理盐水，甲醇。
1.3 动物
SD大鼠，雌雄兼用，200-250g （青龙山动物养殖基地提供）。
2 研究方法
2.1 大鼠在体单向肠灌流实验方法[1，2，3]
实验前将大鼠禁食过夜（自由饮水），空腹注射0.2g/ml乌拉坦溶液麻醉（0.5ml/100g），固定，沿腹中线打开腹腔约3-4cm，取待考察的肠段，于两端切口，用预热至37℃的生理盐水将肠内容物冲洗干净，切口处插管结扎，装好装置。红外灯下保持37℃体温，伤口处用浸有生理盐水的脱脂棉覆盖保温。取预热至37℃的供试液适量，以0.2ml/min的流速灌流平衡30min。更换供试液，进口处用已称量过质量的装有供试液的采样管灌流，流速0.2ml/min。出口用已称量质量的收集管收集流出液并开始计时，每个15min更换供试液和收集采样管。称重，分别计算灌入的质量Min和流出的质量Mout。用HPLC法测定流出液的药物浓度。实验持续时间为105min。实验结束后将大鼠处死，剪下被灌流的各肠段，测量其长度（l）和内半径（r）。
2.2 灌流液样品的处理方法
取灌流液样品500ul，加入500ul甲醇，涡旋30秒后，12000rpm高速离心10min，按2.2.1色谱条件检测，得到A，带入图1的线性回归方程，求得各流出液的药物浓度。
2.3 数据分析方法
采用质量法[4，5]计算药物的吸收速率常数（Ka）和表观吸收系数（Papp）。
式中：V in和V out分别为灌入和收集的供试液体积（mL）（假定供试液密度为1.0kg·L-1，根据测得质量计算体积），Q 为灌流速度（0.2mLomin-1），Cin 、Cout分别为进口和出口处缓冲液中药物的质量浓度（g·L-1），l 和r 分别为被灌流肠段的长度（cm）和横截面半径（cm）。
3 药物不同肠段吸收特性的考察
3.1 实验方法
取大鼠3只，每只分别取以下肠段：十二指肠段为自幽门下1cm处开始；空肠段为自幽门15cm处开始；回肠段为自盲肠上行20cm处开始；结肠段为紧邻盲肠至直肠。各肠段均取10cm左右，方法同“2.1”，取“1.2”配制的10ug/ml药物溶液作为供试液，灌流速度为0.2mL·min-1，持续105min，每15min换液，计算并比较各肠段的Ka和Papp值，结果见表1。
3.2 结果与讨论
3.2.1
通过大鼠各肠段药物吸收的研究表明，甲苯磺酸索拉非尼在各肠段均具有较高的表观吸收系数和药物吸收速率常数。单因素方差分析进行两两比较，十二指肠与结肠Ka无显著差异（P>0.05），十二指肠与空肠Papp无显著差异（P>0.05），其它参数比较均有显著差异（P<0.05）。其吸收窗为全肠段，十二指肠和结肠吸收最好。
4 药物浓度对药物吸收的影响
4.1 试验方法
取大鼠6只，随机分为2组，分别以“1.2.2” 配制的5ug/ml和20ug/ml的药物溶液作为供试液，按3.2.1法，以空肠[9]为灌流部位，考察不同药物浓度对吸收的影响。灌流速度0.2mLomin-1，每隔15min更换供试液，持续105min，比较3种不同药物浓度下的ka和Papp值，以评价药物浓度对药物吸收的影响。结果见表2和表3。
4.2 结果与讨论
单因素方差分析进行两两比较，5ug/ml的Ka和Papp较高，且与10ug/ml和20ug/ml有显著性差异，10ug/ml和20ug/mlKa和Papp无显著性差异。表明药物在大鼠空肠段的吸收存在自身浓度抑制现象即药物在肠道的吸收存在饱和现象，提示其在体内的转运可能存在主动转运或促进扩散作用，增大药物与肠粘膜的接触面积是提高药物吸收程度的有效方法。
5 P-gp抑制剂维拉帕米对药物吸收的影响
5.1 试验方法
取大鼠3只，以加入P-gp抑制剂维拉帕米的10ug/ml药物溶液为灌流液，按3.2.1法，以空肠段作为灌流部位，考察P-gp抑制剂维拉帕米对吸收的影响。灌流速度0.2 mLomin-1，每隔15min更换供试液，持续105min，比较加入P-gp抑制剂维拉帕米和未加时的ka和Papp值，以评价P-gp抑制剂维拉帕米对药物吸收的影响。结果见表4。
5.2 结果与讨论
单因素方差分析进行两两比较，Ka和Papp均无显著性差异（P>0.05），表明药物不是P-gp抑制剂的底物。
6 结果与讨论
文献报道[6]，大鼠Papp小于0.03×10e22
cm/s（即0.18×10-3cm·min-1）和大于0.2×10-4cm/s（即1.2×10-3cm·min-1）時，分别表示药物难以吸收和易于吸收。本实验得出Papp大于1.2×10-3cm·min-1，表明甲苯磺酸索拉非尼在大鼠肠道内易于吸收。
通过研究可认为甲苯磺酸索拉非尼在肠道的吸收良好，因此不需考察吸收促进剂的对其吸收的促进作用。
参考文献
[1]洪丽娟，潘卫三，潘裕生，周彩红，颜廷旭，聂淑芳.尼美舒利大鼠在体肠吸收动力学[J].中国新药与临床杂志，2009，28（2）.
[2]许蕾，杨中林.大鼠在体单向灌流法研究橙皮苷肠道吸收性质[J].中国药学杂志，2009，44（8）.
[3]杜秋，狄留庆*，单进军，刘陶世，张新庄.在体单向肠灌流模型研究瑞香素的大肠吸收特性[J].药学学报，2009，44（8）：922-926.
[4]聂淑芳，潘卫三，杨星钢，等.对大鼠在体肠单向灌流技术中重量法的评价[J].中国新药杂志，2005，14（10）：117621179.
[5]金玲宇，张宇，马妮楠，孙彦辉，焦成美，李三鸣.盐酸文拉法辛大鼠在体肠吸收特性考察[J].中国药剂学杂志，2008，6（3）.
[6]FAGERHOLM U，JOHASSON M，LENNERNASH.Comparision beTween permeability coefficients in rat and human jejunum [J].Pharm Res，1996.13（9）：336-342.