【摘 要】
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目的 探讨AngiotensinⅡ诱导巨噬细胞氧化应激反应与AMPK/SIRT1通路活化关系的机制.方法 RAW264.7细胞正常培养后给予不同浓度的AngiotensinⅡ(0、0.5、1、3、10、20μmol/L)
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属武汉市中心医院药学部,湖北 武汉 430014;广州中医药大学中药学院,广东广州 511400;广州市第一人民医院中医科,广东 广州 511400;广州医科大学第三附属医院妇
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目的 探讨AngiotensinⅡ诱导巨噬细胞氧化应激反应与AMPK/SIRT1通路活化关系的机制.方法 RAW264.7细胞正常培养后给予不同浓度的AngiotensinⅡ(0、0.5、1、3、10、20μmol/L)处理24 h后,Western blot检测AMPK,p-AMPK和SIRT1的表达水平变化,和用DCFH探针检测ROS水平的变化,试剂盒检测细胞上清液中SOD活性和MDA表达量;同时采用基因编辑技术将AngiotensinⅡ的受体AT1R成功沉默后给予AngiotensinⅡ刺激,检测对AMPK,p-AMPK和SIRT1蛋白水平的影响以及使用ROS的抑制剂来观察细胞AMPK和SIRT1的变化情况.结果 20μmol/L的AngiotensinⅡ的刺激能显著抑制蛋白AMPK的磷酸化(P<0.05),抑制SIRT1的表达;同时增加了细胞ROS的释放(P0.05),20μmol/L的AngiotensinⅡ明显抑制SOD活性(P<0.05),能显著增加MDA的产生.沉默了AT1R后,AngiotensinⅡ不能抑制AMPK蛋白磷酸化以及对SIRT1的表达无明显下调作用;使用ROS抑制剂后,AngiotensinⅡ处理无法降低细胞磷酸化AMPK和SIRT1的表达.结论 AngiotensinⅡ通过诱导巨噬细胞发生氧化应激反应从而引起AMPK/SIRT1信号通路的紊乱.
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