【摘 要】
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目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)Linc00858通过调控靶向小分子RNA?3126?5p(miR?3126?5p)影响肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制.方法 通过实时荧光定量PCR(qRT?PCR)法检测Linc00858在肝癌组织、癌旁正常组织、人正常肝细胞LO2和人肝癌细胞系中的表达情况及两者相对关系.筛选出人肝癌细胞HUH?7和MHCC?97H作为研究对象,分别转染Linc00858过表达和干扰Linc00858表达的重组慢病毒,使用qRT?PCR测定转染效果,通过CCK?8实验、Tr
【机 构】
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贵州医科大学临床医学院,贵阳550004;贵州医科大学附属医院肝胆外科,贵州医科大学肝胆胰脾重点实验室,贵州省肝胆胰脾疾病研究所,贵阳550004
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目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)Linc00858通过调控靶向小分子RNA?3126?5p(miR?3126?5p)影响肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制.方法 通过实时荧光定量PCR(qRT?PCR)法检测Linc00858在肝癌组织、癌旁正常组织、人正常肝细胞LO2和人肝癌细胞系中的表达情况及两者相对关系.筛选出人肝癌细胞HUH?7和MHCC?97H作为研究对象,分别转染Linc00858过表达和干扰Linc00858表达的重组慢病毒,使用qRT?PCR测定转染效果,通过CCK?8实验、Transwell实验检测肿瘤细胞的增殖、迁移及侵袭能力,Western blot实验检测Linc00858对上皮?间质转化和细胞周期相关的蛋白表达水平的影响;生物信息学预测和双荧光素酶报告实验确定两者的结合关系.调整Linc00858的表达水平后,采用qRT?PCR法检测肝癌细胞中miR?3126?5p表达水平的变化,将miR?3126?5p mimics和miR?3126?5p inhibitor分别进行转染,通过上述方法再次检测肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力及相关蛋白表达情况.结果 Linc00858在肝癌组织和细胞中的表达量高于癌旁正常组织和LO2;过表达Linc00858后HUH?7细胞增殖、迁移及侵袭能力明显上升,细胞周期蛋白E1(cyclin E1)、周期素依赖性激酶2(CDK2)和波形蛋白(Vimentin)的表达明显上升,P27和钙粘附蛋白E(E?cadherin)的表达明显下降;沉默Linc00858可以抑制MCHH?97H细胞增殖、迁移及侵袭能力,cyclin E1、CDK2和Vimentin的表达明显下降,P27和E?cadherin的表达明显上升;Linc00858靶向调控miR?3126?5p的表达,miR?3126?5p mimics能明显逆转过表达Linc00858对HUH?7细胞的增殖、迁移及侵袭能力以及相关蛋白表达水平;miR?3126?5p inhibitor可以逆转沉默Linc00858对MHCC?97H细胞的增殖、迁移及侵袭能力以及相关蛋白表达水平.结论 Linc00858通过负向调控miR?3126?5p来促进肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移.
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