【摘 要】
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高黏度发酵液具有菌体不易分离的特点。为了从γ-聚谷氨酸高黏发酵液中提取细菌总核糖核酸,利用磷酸缓冲液稀释发酵液、离心收集、焦碳酸二乙酯水洗涤以及溶菌酶处理的四步法
【机 构】
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广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,广西大学微生物及植物遗传工程教育部重点实验室,广西大学生命科学与技术学院
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(31560448);广西自然科学基金资助项目(2015GXNSFBA139052);广西研究生教育创新计划资助项目(YCSZ2015042)
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高黏度发酵液具有菌体不易分离的特点。为了从γ-聚谷氨酸高黏发酵液中提取细菌总核糖核酸,利用磷酸缓冲液稀释发酵液、离心收集、焦碳酸二乙酯水洗涤以及溶菌酶处理的四步法收集菌体并制备核糖核酸待分离样品,进而分别采用RNAiso plus提取法,EZ-10 RNA Miniprep kit试剂盒及Pure Link RNA Mini kit试剂盒法提取总核糖核酸,并通过琼脂糖凝胶电泳、核酸浓度检测仪和反转录聚合酶链式反应比较了三种方法提取总核糖核酸的效果。结果表明,四步法获得的菌体样品可以满足后续总核糖核酸提取的要求,三种方法提取的核糖核酸均能满足一般反转录聚合酶链式反应的要求,其中Pure Link和RNAiso提取的核糖核酸A260nm/A230nm>2.0,纯度较好,Pure Link具有快速提取的优势而RNAiso则适用于大量样品的提取。
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