【摘 要】
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目的研究NGAL重组蛋白促进人结肠癌细胞SW480转移的作用机制。方法通过基因工程方法构建重组表达载体pet32a-tev-NGAL,转化大肠杆菌(BL21-DE3)进行表达;采用亲和层析纯化,并
【机 构】
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四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室,成都医学院生物医学系
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目的研究NGAL重组蛋白促进人结肠癌细胞SW480转移的作用机制。方法通过基因工程方法构建重组表达载体pet32a-tev-NGAL,转化大肠杆菌(BL21-DE3)进行表达;采用亲和层析纯化,并用tev酶进行酶切获得NGAL重组蛋白;Transwell与基质胶实验检测NGAL对细胞迁移、侵袭能力的影响;Western blot检测NGAL对肿瘤转移相关蛋白表达的影响;ELISA检测不同肿瘤分期结肠癌患者血液中NGAL表达情况。结果成功构建pet32a-tev-NGAL原核表达载体,并通过体外表达与纯化获得NGAL重组蛋白;该蛋白促进SW480的迁移和侵袭;Western blot检测结果表明,NGAL激活EMT信号通路;ELISA结果表明,NGAL表达量与肿瘤恶化程度成正相关。结论 NGAL通过激活EMT信号通路促进结肠癌细胞SW480转移。
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