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目的优选大鼠单个胃肠平滑肌细胞的分离方法。方法采用4因素5水平均匀设计实验,以细胞形态评分和有效细胞数为评价指标,研究酶解法消化分离单个大鼠胃肠平滑肌细胞的最佳实验条件。结果分离单个胃平滑肌细胞的最优条件为0.020%大豆胰蛋白酶抑制剂与0.40%Ⅱ型胶原酶联合催化,温度30℃,消化2 h;分离单个肠平滑肌细胞的最优条件为0.005%大豆胰蛋白酶抑制剂与0.10%Ⅱ型胶原酶联合催化,温度34℃,消化2.5 h。结论通过均匀设计实验能优选大鼠单个胃肠平滑肌细胞分离条件,方法简便可行。