【摘 要】
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目的:构建pCDH-Flag-NGFP-TERT、pCDH-Myc-TPP1-CGFP基因的真核表达载体,验证TPP1-CGFP蛋白能募集到端粒区,并通过GFP蛋白自发重建检测TERT与TPP1的相互作用.方法:以相应质粒为模板,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增出NGFP、CGFP、TPP1的CDS区编码序列.通过酶切、重组将NGFP插入到pCDH-Flag-TERT载体上,将TPP1-CGFP插入到pCDH-Myc-POT1-v5tag载体上.经菌液
【机 构】
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军事科学院军事医学研究院生物工程研究所 北京 100089;陆军边防第三六一团卫生队 西藏 859600;新疆军区信息通信旅 西藏 859499
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目的:构建pCDH-Flag-NGFP-TERT、pCDH-Myc-TPP1-CGFP基因的真核表达载体,验证TPP1-CGFP蛋白能募集到端粒区,并通过GFP蛋白自发重建检测TERT与TPP1的相互作用.方法:以相应质粒为模板,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增出NGFP、CGFP、TPP1的CDS区编码序列.通过酶切、重组将NGFP插入到pCDH-Flag-TERT载体上,将TPP1-CGFP插入到pCDH-Myc-POT1-v5tag载体上.经菌液PCR、载体酶切及测序验证后转染到293T细胞中,采用蛋白质印迹法检测其表达,免疫荧光和端粒Fish验证TPP1-CGFP能募集到端粒区,将TPP1-CGFP与NGFP-TERT共转重新组装成GFP蛋白验证其相互作用.结果:双酶切结果显示载体构建成功;Western blot结果显示蛋白质成功表达;免疫荧光及端粒Fish显示TPP1-CGFP能募集到端粒区,质粒共转能重新组装成GFP蛋白说明两者有相互作用.结论:真核表达载体构建成功,并证明TPP1-CGFP能募集到端粒区,且拆分后的GFP蛋白能由连接蛋白的相互作用而重新组装并发绿色荧光,为研究端粒酶与TPP1蛋白及端粒的相互作用提供了可视化的细胞模型.
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目的:冠突曲霉(Aspergillus cristatus)是一种同宗结合菌,它的产孢受渗透压调控,与构巢曲霉的光调控产孢机制存在较大差异.冠突曲霉的有性生殖主要受MAT1-1-1和MAT1-2-1调控,但MAT基因对该菌有性生殖的调控机制仍不清楚.期望筛选得到冠突曲霉MAT的互作蛋白,为深入研究冠突曲霉有性产孢机制奠定基础.方法:利用GST pull-down联合液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术筛选可能与冠突曲霉MAT1-1-1和MAT1-2-1互作的蛋白,结合ProteinPilot和冠突曲
目的:构建α1亚基诱导表达、β2和γ2L亚基稳定表达的人源α1β2γ2L-GABAAR-CHO(Chinese hamster ovary)细胞株.方法:从人cDNA文库中扩增α1、β2、γ2L亚基编码基因,分别构建亚基表达载体;将三个亚基表达载体共转染CHO-K1细胞,通过抗性筛选、膜电位检测法进行稳定表达克隆筛选;通过qPCR、Western blot对亚基表达进行鉴定;以激动剂GABA、阳性变构调节剂地西泮(diazepam,Dia)、拮抗剂荷包牡丹碱(bicuculine)为工具药,采用全细胞膜片
目的:提高地衣芽孢杆菌BF-002的芽孢产量,实现氮源流加过程的自动化控制,降低生产成本,为其他芽孢杆菌提高芽孢产率的研究提供一种思路.方法:通过摇瓶做单因素实验,筛选最佳温度和碳氮源,在此基础上进行5 L发酵罐实验.初始添加不同浓度的氮源,探索芽孢形成与氮源的关系.提出相对氨基氮的概念,通过恒速补料、间歇补料和基于尾气C02浓度反馈流加三个策略控制相对氨基氮浓度水平.采用Python语言编写计算机控制程序,实现基于尾气C02浓度反馈流加策略的自动化控制.结果:摇瓶筛选最佳温度及碳氮源分别为:37℃、葡萄
近年来,转运 RNA(transfer RNA,tRNA)衍生的小 RNA(tRNA-derived small RNA,tsRNAs)被认为是一种新的、潜在的非编码RNAs(non-coding RNA,ncRNAs).根据在前体或成熟tRNA上切割位置的不同,tsRNAs主要被分为两种类型,即tRNA halves(tRNA-derived stress-induced RNA,tiRNAs)和tRNA衍生片段(tRNA-derived fragment,tRFs).越来越多的证据表明,tsRNAs参
随着人造肉热潮的兴起,血红素作为其呈色物质也愈发引起研究者的兴趣.血红素是一种含Fe2+的卟啉类化合物,以5-氨基乙酰丙酸为唯一前体物,在生物体中分别通过粪卟啉依赖性、原卟啉依赖性和西罗血红素依赖性三个途径合成,被认为是一种理想的补铁剂和着色剂.与化学合成法和生物提取法相比,微生物合成法具有操作方便、环境友好等优点,因此是一种非常有前景的血红素生产方法.介绍血红素的合成途径,总结微生物以5-氨基乙酰丙酸为唯一前体物合成血红素的最新进展,并简要分析其面临的挑战和前景.
近些年来,治疗性重组蛋白类药物是生物制药领域研究的热点.工业化生产中常用于重组蛋白表达的细胞系是中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞.传统CHO细胞系的表达大多数基于随机整合的方式,这可能会使目标基因整合到异染色质区域或者不稳定的染色质区域,导致CHO细胞表达不稳定,需要多轮筛选才能获得理想的表达细胞系.最新研究表明,外源基因在CHO细胞预测/特定的基因组位点中进行特异性整合,可以使重组CHO细胞的表达保持长期一致性和稳定性.CHO细胞基因组中高效稳定的转录整合位点被称为
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噬菌体在自然界中分布广泛,是一类感染细菌的病毒总称.同时噬菌体繁殖迅速,对宿主的选择具有非常高的特异性,当其作为细菌感染的抗生素替代疗法时不易让宿主菌形成耐药性.因其严格寄生,其增殖过程除受环境因素(pH、离子强度、温度)影响外,往往还受宿主代谢水平的影响.在外部环境因素中,温度对噬菌体的影响尤为突出,其对噬菌体的活性、稳定性、保藏和进化等都有重要影响.对噬菌体在温度适应性机制研究方面的研究进展进行了总结,重点对噬菌体在温度胁迫下的适应性进化研究进行了整理和归纳,以期为进一步开展噬菌体研究提供帮助.
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