【摘 要】
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目的通过过表达水通道蛋白-8(AQP-8)真核表达载体,探讨AQP-8水通道蛋白对HT-29细胞凋亡、增殖及化疗药敏性的影响。方法取对数生长期的人结肠癌HT-29细胞株用于实验。构建AQP
【机 构】
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河北省武安市第一人民医院普外二科,河北省人民医院普外二科,河北省人民医院检验科
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目的通过过表达水通道蛋白-8(AQP-8)真核表达载体,探讨AQP-8水通道蛋白对HT-29细胞凋亡、增殖及化疗药敏性的影响。方法取对数生长期的人结肠癌HT-29细胞株用于实验。构建AQP-8真核表达载体并转染HT-29细胞,通过Western blot检测GFP-AQP-8转染效率;采用SRB法检测3组细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡率;分光光度法检测细胞caspase-3活性;Real Time-PCR和Western blot检测PCNA和P53表达。转染前后,分别用5-氟尿嘧啶(5-Fu)和顺铂(DDP)刺激细胞,SRB检测3组细胞的增殖抑制率。结果 GFPAQP-8转染HT-29细胞后,Western blot结果显示,细胞AQP-8基因表达显著上调(P<0.05);SRB分析结果显示,细胞增殖抑制率显著增加(P<0.05);流式细胞术检测发现,处于G0/G1期的细胞数明显增加(P<0.05),S期的细胞数则显著降低(P<0.05);细胞凋亡率升高(P<0.05);细胞caspase-3活性增强(P<0.05);Real Time-PCR和Western blot结果显示,细胞增殖相关基因PCNA的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而凋亡基因P53的mRNA和蛋白表达水平明显增加(P<0.05)。GFP-AQP-8转染联合化疗药物5-Fu处理、GFP-AQP-8转染联合化疗药物DDP处理HT-29细胞较转染对照空质粒组细胞增殖抑制率显著增加,联合用药组对细胞增殖的抑制率显著高于单独转染GFP-AQP-8组和单独给予5-Fu或DDP组(P<0.05)。结论过表达AQP-8可抑制HT-29细胞生长、促进其凋亡、提高细胞对5-Fu和DDP的化疗敏感性。
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