【摘 要】
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目的 探讨膝痹宁通过肉毒碱棕榈酰转移酶（CPT1）调节大鼠滑膜氧化还原稳态缓解膝骨关节炎（KOA）疼痛的效应机制。方法 提取大鼠膝关节成纤维样滑膜细胞（FLS），采用CCK-8法筛选膝痹宁冻干粉干预FLS细胞的合适作用浓度。将FLS细胞分为对照组、KOA组、膝痹宁组，后两组采用5μg/ml脂多糖（LPS）诱导KOA炎症细胞模型，膝痹宁组加入100μg/ml膝痹宁，培养24 h。采用Real-tim
【基金项目】
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国家自然科学基金（81904224）； 江苏省中医药领军人才项目（SLJ0207）； 江苏省研究生培养创新工程资助项目（KYCX21＿1645,KYCX21＿1675）～～；
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目的 探讨膝痹宁通过肉毒碱棕榈酰转移酶（CPT1）调节大鼠滑膜氧化还原稳态缓解膝骨关节炎（KOA）疼痛的效应机制。方法 提取大鼠膝关节成纤维样滑膜细胞（FLS），采用CCK-8法筛选膝痹宁冻干粉干预FLS细胞的合适作用浓度。将FLS细胞分为对照组、KOA组、膝痹宁组，后两组采用5μg/ml脂多糖（LPS）诱导KOA炎症细胞模型，膝痹宁组加入100μg/ml膝痹宁，培养24 h。采用Real-time PCR和Western blotting检测CPT1、肉碱/有机阳离子转运体1（OCTN1） mRNA和蛋白的表达；采用试剂盒检测CPT1、超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量；使用2?,7?-二氯荧光素二乙酸酯检测活性氧（ROS）水平。提取大鼠背根神经节（DRG）神经元细胞，采用βⅢ-微管蛋白（βⅢ-tubulin）与胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫荧光染色进行鉴定。将收集的各组FLS上清加入DRG神经元中干预24 h，分别设为对照组、KOA组、膝痹宁组，采用Real-time PCR和Western blotting检测DRG神经元瞬时受体电位A1离子通道（TRPA1）mRNA和蛋白的表达，实时荧光钙成像观察DRG神经元中TRPA1开放后Ca2+内流情况，ELISA法检测降钙素基因相关肽（CGRP）和P物质（SP）水平。结果 选取膝痹宁冻干粉浓度100μg/ml进行实验。Real-time PCR和Western blotting检测结果显示，膝痹宁组CPT1、OCTN1 mRNA和蛋白表达水平高于KOA组（P＜0.05）。与对照组比较，KOA组ROS水平[（26.46±2.07） AU vs.（5.52±0.78） AU]和MDA含量[（3.13±0.02） nmol/ml vs.（2.77±0.03） nmol/ml]明显升高（P＜0.05）,CPT1[（4.98±0.02） nmol/min vs.（11.50±0.21） nmol/min]和SOD[（11.38±0.05） U/ml vs.（17.6±0.07） U/ml]活性明显降低（P＜0.05）；与KOA组比较，膝痹宁组ROS水平[（14.07±1.41） AU]和MDA含量[（2.87±0.01） nmol/ml]明显降低（P＜0.05）,CPT1[（7.94±0.21） nmol/min]和SOD活性[（13.81±0.07） U/ml]明显升高（P＜0.05）。与KOA组比较，膝痹宁组FLS上清干预可抑制DRG神经元中TRPA1 mRNA和蛋白的表达，以及TRPA1开放后Ca2+的内流（P＜0.05），降低CGRP和SP表达量[（19.93±1.2） ng/L vs.（30.19±1.58） ng/L,P＜0.05;（84.23±1.26） ng/L vs.（123.16±2.95） ng/L,P＜0.05]。结论 膝痹宁可能通过CPT1调控大鼠滑膜细胞氧化还原稳态而影响DRG神经元细胞膜上TRPA1的Ca2+内流，减少疼痛因子的分泌，从而发挥减轻KOA疼痛的作用。
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