【摘 要】
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目的构建鼠源pEGFP-C2-NLRC5表达质粒,并观察其在RAW264.7细胞中的表达。方法从小鼠巨噬细胞RAW264.7中获得NLRC5基因的cDNA,用EcoRⅠ和BamHⅠ限制性内切酶双酶切后连接至pEG
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目的构建鼠源pEGFP-C2-NLRC5表达质粒,并观察其在RAW264.7细胞中的表达。方法从小鼠巨噬细胞RAW264.7中获得NLRC5基因的cDNA,用EcoRⅠ和BamHⅠ限制性内切酶双酶切后连接至pEGFP-C2载体上。表达载体经PCR、限制性内切酶酶切和DNA序列分析正确后转染至小鼠巨噬细胞RAW264.7中,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,RT-PCR法鉴定其转录,Western blot法分析其蛋白表达。结果进行双酶切鉴定该质粒可见NLRC5DNA片段,转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR法可检测到NLRC5基因的转录,Western blot法可检测到NLRC5蛋白表达。结论成功构建重组pEGFP-C2-NLRC5表达载体,NLRC5蛋白可与绿色荧光蛋白在RAW264.7细胞中融合表达。
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