【摘 要】
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目的探讨MAPK信号传导途径在介导人肺泡巨噬细胞吞噬细菌中的作用。方法使用Ficoll-Hypaque密度梯度法将外周血单核细胞分离自13名健康志愿者外周血，经2 μg/L粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子诱导培养12 d成单核细胞源性巨噬细胞(GM-MØ)，即肺泡巨噬细胞研究替代细胞模型。用共聚焦荧光显微镜检测GM-MØ吞噬荧光标记的金黄色葡萄球菌；使用多功能酶标仪检测p38 MAPK、ERK、JNK
【机 构】
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510180 广州医科大学附属广州市第一人民医院呼吸内科,510180 广州医科大学附属广州市第一人民医院呼吸内科,510180 广州医科大学附属广州市第一人民医院呼吸内科,510180 广州医科大学
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目的探讨MAPK信号传导途径在介导人肺泡巨噬细胞吞噬细菌中的作用。
方法使用Ficoll-Hypaque密度梯度法将外周血单核细胞分离自13名健康志愿者外周血，经2 μg/L粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子诱导培养12 d成单核细胞源性巨噬细胞(GM-MØ)，即肺泡巨噬细胞研究替代细胞模型。用共聚焦荧光显微镜检测GM-MØ吞噬荧光标记的金黄色葡萄球菌；使用多功能酶标仪检测p38 MAPK、ERK、JNK特异性抑制剂对GM-MØ吞噬金黄色葡萄球菌量的影响。以细胞吞噬抑制剂细胞松弛素D为阳性对照。
结果GM-MØ吞噬金黄色葡萄球菌呈时间依赖，4 h后呈逐渐饱和状态。以吞噬反应4 h为观测终点，共聚焦荧光显微镜检测显示绝大部分金黄色葡萄球菌均被吞噬进细胞内。使用细胞松弛素D后，GM-MØ对金黄色葡萄球菌的吞噬几乎全部被抑制，其荧光值为(4 259±869) RFU；p38α MAPK特异性抑制剂GW856553随着浓度的升高可抑制GM-MØ对金黄色葡萄球菌的吞噬，并呈浓度依赖性：浓度为10-6 mol/L时荧光值为(18 290±5 491) RFU，浓度为10-5 mol/L时荧光值为(16 802±6 440) RFU，与空白对照[(19 489±5 450) RFU]相比差异均有统计学意义。而ERK抑制剂UO126和JNK抑制剂SP600125在各实验浓度下(10-8～10-5 mol/L)均对GM-MØ吞噬金黄色葡萄球菌无影响。
结论p38 MAPK途径可能参与了介导人肺泡巨噬细胞对细菌的吞噬作用，而ERK及JNK信号传导途径与此无关。
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