【摘 要】
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目的:表达并纯化mLST8 蛋白。方法:PCR 扩增 mLST8 的编码 cDNA,克隆到 pET-28a(+)表达载体,将重组质粒 pET-28a-mLST8 转化大肠杆菌 BL21(DE3)感受态细胞,在 IPTG 诱导下表达目的蛋白;
【机 构】
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西南大学生命科学学院,解放军第三Ο九医院器官移植与免疫调节北京市重点实验室
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目的:表达并纯化mLST8 蛋白。方法:PCR 扩增 mLST8 的编码 cDNA,克隆到 pET-28a(+)表达载体,将重组质粒 pET-28a-mLST8 转化大肠杆菌 BL21(DE3)感受态细胞,在 IPTG 诱导下表达目的蛋白;提取包涵体,用 Ni2+亲和层析纯化目的蛋白,稀释和透析相结合进行复性,对复性蛋白进行阴离子交换层析、分子筛层析,将纯的复性 mLST8进行肽指纹质谱鉴定和圆二色谱分析。结果:酶切和 DNA 测序证明 pET-28a-mLST8 表达质粒构建无误,并在大肠杆菌中得到高效
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