【摘 要】
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旨为筛选并构建II型内含子编码蛋白Mg2+结合位点突变体,验证该位点突变对II型内含子“归巢”效率的影响。利用生物信息学技术筛选关键位点,利用定点突变技术构建突变体,利用T
【机 构】
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贵州医科大学基础医学院,遵义医科大学第三附属医院（遵义市第一人民医院）,贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室,贵州省分子生物学重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31760318,31601012),贵州省科技计划项目(黔科合基础[2018]1132,[2019]1441),贵州医科大学培育项目(黔科合平台人才[2018]5779-17)
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旨为筛选并构建II型内含子编码蛋白Mg2+结合位点突变体,验证该位点突变对II型内含子“归巢”效率的影响。利用生物信息学技术筛选关键位点,利用定点突变技术构建突变体,利用Targetron及蓝白斑计数法验证其“归巢”效率。结果显示,筛选到D308和D309两个位点是II型内含子编码蛋白Mg2+结合的核心催化位点,并成功构建该位点的三种突变体,包括两个单点突变体(D308A和D309A)和一个双点突变体(D308A/D309A),大肠杆菌体内实验结果表明,三种突变体均完全失活了II型内含子的“归巢”功能。证
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