【摘 要】
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目的 通过玻璃体注射重组腺相关病毒2载体(rAAV2)和慢病毒载体(LV),比较两者转染成年大鼠视网膜的异同.方法 实验组大鼠60只,每组12只玻璃体内分别注射重组腺相关病毒2载体-
【机 构】
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第二军医大学基础部解剖学教研室,上海,200433
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目的 通过玻璃体注射重组腺相关病毒2载体(rAAV2)和慢病毒载体(LV),比较两者转染成年大鼠视网膜的异同.方法 实验组大鼠60只,每组12只玻璃体内分别注射重组腺相关病毒2载体-增强绿色荧光蛋白(rAAV2-EGFP)、重组腺相关病毒2载体-神经突起素-增强绿色荧光蛋白(rAAV2-neuritin-EGFP)、慢病毒载体-红色荧光蛋白(LV-RFP)和慢病毒载体-神经突起素-红色荧光蛋白(LV-neuritin-RFP),对照组注射等量的生理盐水,4周后取材,采用免疫荧光和CTB-FITC检测2种病毒载体在视网膜中转染的细胞及转染率,然后分别采用Real-timePCR和Western blotting检测神经突起素(neuritin)在视网膜中的表达变化.结果 rAAV2能够转染约70％视网膜节细胞(RGCs),LV主要转染色素上皮细胞,RGCs转染率仅为30％;rAAV2-neuritin-EGFP组神经突起素mRNA表达约是rAAV2-EGFP组和对照组的16倍,蛋白表达约为3倍;LV-neuritin-RFP组神经突起素mRNA表达约是LV-RFP组和对照组的5.5倍,蛋白表达约为1.7倍.结论 rAAV2玻璃体注射后,转染大部分RGCs且神经突起素表达量高于LV,LV主要转染色素上皮细胞,提示基因治疗眼科疾病和损伤时,涉及到转染RGCs时应采用rAAV2载体,转染色素上皮时宜采用LV载体.
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