【摘 要】
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本研究旨在建立一种简便高效的原代大鼠肾小球微血管内皮细胞体外培养方法.摘取出生7～10天Sprague-Dawley大鼠的双侧肾脏,分离出肾皮质;经剪碎,连续过200目、300目筛网获得肾小球;IV型胶原酶消化15～20min后,收集肾微血管球进行接种培养.通过细胞形态学观察、第Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学染色鉴定所培养的细胞.结果显示:肾微血管球呈不规则球形,无包囊,毛细血管袢结构清晰;静置培养3天后,有短梭形细胞从其周围爬出,并逐渐形成细胞集落,呈“岛屿状”分布;4～5天后细胞集落相互融合,6天后铺满皿
【机 构】
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北京中医药大学中医学院伤寒教研室,北京102488;福建中医药大学中西医结合学院,福州350122;南京医科大学基础医学院,南京211116;福建中医药大学中医学院,福州350122
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本研究旨在建立一种简便高效的原代大鼠肾小球微血管内皮细胞体外培养方法.摘取出生7～10天Sprague-Dawley大鼠的双侧肾脏,分离出肾皮质;经剪碎,连续过200目、300目筛网获得肾小球;IV型胶原酶消化15～20min后,收集肾微血管球进行接种培养.通过细胞形态学观察、第Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学染色鉴定所培养的细胞.结果显示:肾微血管球呈不规则球形,无包囊,毛细血管袢结构清晰;静置培养3天后,有短梭形细胞从其周围爬出,并逐渐形成细胞集落,呈“岛屿状”分布;4～5天后细胞集落相互融合,6天后铺满皿底,呈典型的单层、铺路石样、镶嵌式排列.第Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学染色检测结果显示,胞质淡染成棕红色,第Ⅷ因子相关抗原表达为阳性,阳性率接近100％.以上结果提示,本研究将连续过筛法和胶原酶消化法结合,成功建立了简便高效的原代大鼠肾小球微血管内皮细胞体外培养方法,从而为开展糖尿病肾病的发生和发展机理研究提供了重要的工具细胞.
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