【摘 要】
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目的克隆可溶性成纤维细胞生长因子受体-1(sFGFR-1)基因,并在快速翻译系统(RTS)中高效表达相应蛋白.方法培养Swiss Rat 3T3成纤维细胞株,提取总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT
【机 构】
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西安,第四军医大学全军基因诊断技术研究所
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目的克隆可溶性成纤维细胞生长因子受体-1(sFGFR-1)基因,并在快速翻译系统(RTS)中高效表达相应蛋白.方法培养Swiss Rat 3T3成纤维细胞株,提取总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法获取鼠sFGFR-1 cDNA片段,酶切后克隆到pIVEX2.3d载体并进行序列分析;采用Roche RTS ProteinMaster 500系统,高效表达sFGFR-1蛋白并用Western blot鉴定表达的蛋白.体外转染大鼠血管内皮细胞.收集培养液上清,检测sFGFR-1及成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)对成纤维细胞增殖抑制作用.结果克隆了sFGFR-1基因,测序证实序列正确;Western blot证实sFGFR-1蛋白在RTS系统中高效表达.FGF-2对STS成纤维细胞增殖具有明显抑制作用.结论克隆sFGFR-1基因在RTS系统获得高效表达.对3T3成纤维细胞具有明显增殖抑制作用.
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