目的 建立高效的腺苷酸依赖的蛋白激酶（AMPK）的制备方法，并建立1种基于酶联免疫吸附（ELISA）法的AMPK的激酶活性检测方法以用于药物筛选。方法 利用大肠杆菌表达系统，将AMPK的α、β和γ 3个亚基与钙调素依赖性蛋白激酶β（CAMKK β）共表达，重组AMPK被CAMKK β磷酸化修饰并激活，进而纯化得到具有激酶活性的重组AMPK蛋白复合体。根据AMPK底物乙酰辅酶A羧化酶（ACC）的磷酸化修饰位点（Ser79）设计合成生物素标记的多肽（SAMS）作为AMPK激酶的底物。在ATP存在的情况下AMPK对生物素标记的SAMS多肽进行磷酸化修饰，反应产物转移到链霉亲和素包被的酶标板中，SAMS多肽通过链霉亲和素结合到酶标板。以能够识别SAMS磷酸化修饰的抗体作为一抗进行ELISA检测，SAMS的磷酸化修饰水平反应AMPK的激酶活性。结果 利用大肠杆菌表达系统成功得到有激酶活性的AMPK蛋白复合体，建立了ELISA检测AMPK的激酶活性方法。通过对AMPK激活剂A-769662检测，证明该方法可以用于AMPK激活剂/抑制剂的筛选。结论 通过构建大肠杆菌共表达系统，成功获得了AMPK激酶，与传统方法相比更为简洁高效；建立的AMPK的激酶活性检测方法操作简单、准确度高且安全高效，有望用于海洋活性分子的大规模筛选，加快我国“蓝色药库”的开发。