论文部分内容阅读
乌头碱是一种双酯类生物碱，也是存在于川乌、草乌、附子等植物中的主要有毒成份，口服纯乌头碱0.2mg即可中毒，3-5mg可致死。川乌、草乌、附子是中医临床常用的中药，具有治疗关节炎、风湿等功效。某些不法商贩、餐饮单位及民众会用草乌、川乌等植物来自制药酒，但由于不能正确掌握药酒的药物配伍、用量，以及不能正确炮制药物，因此时有乌头碱中毒甚至死亡事件发生。由于乌头碱易溶于乙醇，所以特别容易中毒，误服外用的草乌药酒，只需要一小口（10mL）就能使人中毒甚至死亡。
近年来，针对乌头碱的检测方法主要有高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法、薄层色谱法等。不过，上述方法前处理复杂，对设备和人员要求较高，不能满足现场快速检测的需求。目前，检测药酒中乌头碱的快检方法尚未有文献报道，因此建立表面增强拉曼光譜法快速测定药酒中乌头碱的方法，对于现场检测药酒有着重要意义。
本研究以中国劲酒、海王酒、竹叶青酒、椰岛鹿龟酒、宁夏红枸杞酒等药酒为研究对象，通过QuEChERS前处理技术对样品进行提取、净化，结合表面增强试剂与便携式拉曼光谱仪对提取液进行测定，建立了表面增强拉曼技术快速检测药酒中乌头碱的方法。
一、仪器与试剂
1.仪器。ZPR-1201便携式拉曼光谱仪，江苏中朗宏泰科学仪器有限公司;TG16-WS高速离心机，湘仪离心机仪器有限公司;IKA漩涡振荡器，德国IKA集团。
2.试剂。乙腈，色谱纯，百灵威科技有限公司;表面增强试剂、匹配剂，中朗宏泰科学仪器有限公司;无水硫酸镁、无水乙酸钠、氯化钠，分析纯，国药集团化学试剂有限公司;PSA、C18、石墨化炭黑，深圳逗点生物技术有限公司;乌头碱，Sigma-Aldrich公司。所有化学试剂溶液用Milli-Q超纯水（Millipore，Inc.，Bedford，USA）配制。
二、标准溶液配制及样品制备
1.标准储备液配制。准确称取乌头碱标准品各10mg，用乙腈溶解并定容至10mL，摇匀制成浓度为1mg/mL的标准储备液，并于4℃避光环境中保存，使用时用乙腈稀释至所需浓度。
2.标准中间液A配制。精密移取上述浓度为1mg/mL的标准储备液100μL，置于10mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀制成浓度为10μg/mL的标准液。
3.标准中间液B配制。精密移取上述浓度为1mg/mL的标准储备液200μL，置于10mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀制成浓度为20μg/mL的标准液。
三、样品制备
1.样品来源。样品1：中国劲酒，劲牌有限公司;样品2：海王酒，海南椰岛酒业发展有限公司;样品3：竹叶青酒，山西杏花村汾酒厂;样品4：椰岛鹿龟酒，海南椰岛酒业发展有限公司;样品5：宁夏红枸杞酒，宁夏红枸杞产业集团有限公司。
2.阴性样本制备。取5支50mL离心管，分别加入1mL药酒样本，备用。
3.阳性样本制备。取5支50mL离心管，分别加入1mL药酒样本，每支离心管中分别加入浓度为1mg/mL的乌头碱标准溶液10μL，混匀备用。
四、样品测试
1.标准中间液的测定。向玻璃比色皿中依次加入1mL表面增强试剂、100μL待测液、100μL匹配剂，混匀后用激光拉曼光谱仪检测。
2.样品处理。参照文献方法并优化，在装有样品的离心管中依次加入2mL乙腈和由无水硫酸镁、氯化钠组成的萃取填料，涡旋混合1min。萃取完毕后，取1mL上清液，置于装有无水硫酸镁、PSA和C18组成的净化填料的15mL离心管中，涡旋混合1min后，14000r/min离心2min，所得上清液待测。
3.样品测试。向光学玻璃进样瓶中依次加入1mL表面增强试剂、100μL待测液、100μL匹配剂，混匀后用激光拉曼光谱仪检测。阳性样本、阴性样本提取液同时进行HPLC测试。
4.仪器条件。激光波长设定为785nm，激光功率设定为500mW，扫描时间设定为5000ms。
五、结果与讨论
1.特征峰的判断。在激光拉曼光谱仪检测条件下，对标准中间液A、标准中间液B进行测定，得到乌头碱的表面增强拉曼谱图（图1），其特征峰为621cm-1（±3cm-1）。
2.样品检出限测试。先对阴性样本、阳性样本进行前处理，再对样本提取液进行测定，得到乌头碱的表面增强拉曼谱图（图2、图3、图4、图5、图6）。实验结果表明，在阳性样本提取液中分别添加浓度达到10mg/kg的乌头碱药酒样品，其拉曼图谱中均出现了621cm-1（±3cm-1）位置的特征峰信号，而在阴性样本提取液中，同样位置并未出现该处信号;同时，5组阳性样本、阴性样本提取液的HPLC测试结果与拉曼检测结果一致，证明通过表面增强拉曼检测系统对乌头碱的检测限可达到10mg/kg。
本文通过对前处理方式的优化，建立了表面增强拉曼检测系统测定药酒中乌头碱的方法。该方法具有简便、快速、经济、准确、成本低等优点，适用于现场以及实验室快速检测药酒中的乌头碱。
作者简介：谈铭（1988-），硕士研究生，研究方向为食品药品快速检测。
近年来，针对乌头碱的检测方法主要有高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法、薄层色谱法等。不过，上述方法前处理复杂，对设备和人员要求较高，不能满足现场快速检测的需求。目前，检测药酒中乌头碱的快检方法尚未有文献报道，因此建立表面增强拉曼光譜法快速测定药酒中乌头碱的方法，对于现场检测药酒有着重要意义。
本研究以中国劲酒、海王酒、竹叶青酒、椰岛鹿龟酒、宁夏红枸杞酒等药酒为研究对象，通过QuEChERS前处理技术对样品进行提取、净化，结合表面增强试剂与便携式拉曼光谱仪对提取液进行测定，建立了表面增强拉曼技术快速检测药酒中乌头碱的方法。
一、仪器与试剂
1.仪器。ZPR-1201便携式拉曼光谱仪，江苏中朗宏泰科学仪器有限公司;TG16-WS高速离心机，湘仪离心机仪器有限公司;IKA漩涡振荡器，德国IKA集团。
2.试剂。乙腈，色谱纯，百灵威科技有限公司;表面增强试剂、匹配剂，中朗宏泰科学仪器有限公司;无水硫酸镁、无水乙酸钠、氯化钠，分析纯，国药集团化学试剂有限公司;PSA、C18、石墨化炭黑，深圳逗点生物技术有限公司;乌头碱，Sigma-Aldrich公司。所有化学试剂溶液用Milli-Q超纯水（Millipore，Inc.，Bedford，USA）配制。
二、标准溶液配制及样品制备
1.标准储备液配制。准确称取乌头碱标准品各10mg，用乙腈溶解并定容至10mL，摇匀制成浓度为1mg/mL的标准储备液，并于4℃避光环境中保存，使用时用乙腈稀释至所需浓度。
2.标准中间液A配制。精密移取上述浓度为1mg/mL的标准储备液100μL，置于10mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀制成浓度为10μg/mL的标准液。
3.标准中间液B配制。精密移取上述浓度为1mg/mL的标准储备液200μL，置于10mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀制成浓度为20μg/mL的标准液。
三、样品制备
1.样品来源。样品1：中国劲酒，劲牌有限公司;样品2：海王酒，海南椰岛酒业发展有限公司;样品3：竹叶青酒，山西杏花村汾酒厂;样品4：椰岛鹿龟酒，海南椰岛酒业发展有限公司;样品5：宁夏红枸杞酒，宁夏红枸杞产业集团有限公司。
2.阴性样本制备。取5支50mL离心管，分别加入1mL药酒样本，备用。
3.阳性样本制备。取5支50mL离心管，分别加入1mL药酒样本，每支离心管中分别加入浓度为1mg/mL的乌头碱标准溶液10μL，混匀备用。
四、样品测试
1.标准中间液的测定。向玻璃比色皿中依次加入1mL表面增强试剂、100μL待测液、100μL匹配剂，混匀后用激光拉曼光谱仪检测。
2.样品处理。参照文献方法并优化，在装有样品的离心管中依次加入2mL乙腈和由无水硫酸镁、氯化钠组成的萃取填料，涡旋混合1min。萃取完毕后，取1mL上清液，置于装有无水硫酸镁、PSA和C18组成的净化填料的15mL离心管中，涡旋混合1min后，14000r/min离心2min，所得上清液待测。
3.样品测试。向光学玻璃进样瓶中依次加入1mL表面增强试剂、100μL待测液、100μL匹配剂，混匀后用激光拉曼光谱仪检测。阳性样本、阴性样本提取液同时进行HPLC测试。
4.仪器条件。激光波长设定为785nm，激光功率设定为500mW，扫描时间设定为5000ms。
五、结果与讨论
1.特征峰的判断。在激光拉曼光谱仪检测条件下，对标准中间液A、标准中间液B进行测定，得到乌头碱的表面增强拉曼谱图（图1），其特征峰为621cm-1（±3cm-1）。
2.样品检出限测试。先对阴性样本、阳性样本进行前处理，再对样本提取液进行测定，得到乌头碱的表面增强拉曼谱图（图2、图3、图4、图5、图6）。实验结果表明，在阳性样本提取液中分别添加浓度达到10mg/kg的乌头碱药酒样品，其拉曼图谱中均出现了621cm-1（±3cm-1）位置的特征峰信号，而在阴性样本提取液中，同样位置并未出现该处信号;同时，5组阳性样本、阴性样本提取液的HPLC测试结果与拉曼检测结果一致，证明通过表面增强拉曼检测系统对乌头碱的检测限可达到10mg/kg。
本文通过对前处理方式的优化，建立了表面增强拉曼检测系统测定药酒中乌头碱的方法。该方法具有简便、快速、经济、准确、成本低等优点，适用于现场以及实验室快速检测药酒中的乌头碱。
作者简介：谈铭（1988-），硕士研究生，研究方向为食品药品快速检测。